TAHFIA 004-2018 食品中總皂苷含量的測(cè)定 分光光度法.doc

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T/AHFIA 安徽省食品行業(yè)協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn) T/AHFIA 004—2018 ????? 食品中總皂苷含量的測(cè)定 分光光度法 Determination of total saponins in Food Spectrophotometric method 2019 - 01 - 15實(shí)施 ??安徽省食品行業(yè)協(xié)會(huì)??????發(fā)布 2018 - 12 - 26發(fā)布 T/AHFIA 004—2018 前??言 本標(biāo)準(zhǔn)按照 GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省食品行業(yè)協(xié)會(huì)提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：安徽瑞思威爾科技有限公司、安徽古井貢酒股份有限公司、安徽潤(rùn)安信科檢測(cè)科技有限公司。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李安軍、王錄、劉國(guó)英、陸瑋、芮君君、劉智慧、何宏魁、楊恩賀。 I T/AHFIA 004—2018 食品中總皂苷含量的測(cè)定 分光光度法 A 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中總皂苷含量的測(cè)定 分光光度法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中總皂苷含量的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 方法原理 本標(biāo)準(zhǔn)采用香草醛高氯酸分光光度法測(cè)定總皂苷含量。皂苷在強(qiáng)氧化性酸的作用下脫氫，再與香草醛加成顯色，形成特征的紫紅色化合物。在一定濃度范圍內(nèi)，吸光度與皂苷類化合物的含量成正比，符合朗伯-比爾定律。 4 試劑與材料 4.1 試劑 4.1.1 無(wú)水乙醇：分析純。 4.1.2 香草醛：分析純。 4.1.3 冰醋酸：分析純。 4.1.4 高氯酸：分析純。 4.1.5 XAD-2大孔樹(shù)脂：純度≥98%。 4.1.6 無(wú)水氧化鋁：分析純。 4.1.7 水為符合 GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 4.2 試劑配制 4.2.1 香草醛冰醋酸溶液（5%）：精確稱取5 g（精確至0.0001 g）香草醛，用冰醋酸溶解定容至100 mL。 4.2.2 乙醇溶液（70%）：量取700 mL無(wú)水乙醇，用水溶解定容至1000 mL。 4.3 標(biāo)準(zhǔn)品 人參皂苷（Re，CAS號(hào)：52286-59-6），純度≥ 99.0%。 4.4 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取20 mg（精確至0.1 mg）Re標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇溶解定容至50 mL，此溶液中人參皂苷含量為400 mg/L。于4℃冰箱中避光保存。 5 儀器與設(shè)備 5.1 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：配1 cm比色皿。 5.2 分析天平：感量0.1 mg。 5.3 電熱恒溫水浴鍋：0℃~100℃。 5.4 玻璃層析柱：10 mm*40 cm（內(nèi)徑*長(zhǎng)度）。 6 分析步驟 6.1 試樣制備 6.1.1 固體試樣 稱取粉碎均勻的固體試樣5 g（精確至0.0001 g）于100 mL燒杯中，加入30 mL70%乙醇溶液，超聲30min，用70%乙醇溶液定容至50 mL容量瓶。離心至澄清，過(guò)濾備用。 6.1.2 液體試樣 精確吸取5.0 mL液體試樣于50 mL容量瓶中，用70%乙醇溶液定容，搖勻，備用。當(dāng)稀釋后的試樣基質(zhì)較復(fù)雜時(shí)，需過(guò)濾至澄清液備用。 6.2 樣品提取 6.2.1 層析柱的預(yù)處理 取適量樹(shù)脂于燒杯中，使用無(wú)水乙醇浸泡至覆蓋樹(shù)脂2.5 cm~5 cm，緩慢攪拌樹(shù)脂1min以充分混合，靜置2 h。倒出乙醇，用蒸餾水沖洗，直至無(wú)醇味。然后再用等量的無(wú)水乙醇洗滌，充分混合靜置20min，再用蒸餾水洗至無(wú)醇味。對(duì)活化后的樹(shù)脂進(jìn)行分裝，每份樹(shù)脂質(zhì)量為5 g，備用。 6.2.2 樣品純化 精確吸取2.0 mL制備的試樣加入5 g（精確至0.0001 g）活化后的樹(shù)脂中，搖勻，靜置30min。將加樣后的樹(shù)脂移入層析柱中，上加2 g（精確至0.0001 g）無(wú)水氧化鋁，用30 mL水洗柱，棄去洗脫液，再用30 mL70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于60℃水浴揮干。 6.3 測(cè)定 6.3.1 儀器條件 6.3.1.1 測(cè)定波長(zhǎng)：545 nm。 6.3.1.2 比色皿：1 cm。 6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確吸取人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.4）0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL分別置于蒸發(fā)皿中，于60℃水浴揮干，加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)芙?，再加?.6 mL高氯酸（4.1.4），混勻后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加熱20min，取出，冰浴冷卻2min，準(zhǔn)確加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），搖勻后，以1 cm比色皿于545 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。以皂苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 6.3.3 試樣溶液的測(cè)定 在6.2.2樣品純化后的蒸發(fā)皿中加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)芙?，再加?.6 mL高氯酸（4.1.4），混勻后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加熱20min，取出，冰浴冷卻2min，準(zhǔn)確加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），搖勻后，在30min內(nèi)以1 cm比色皿于545 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。 7 分析結(jié)果表述 試樣中總皂苷的含量用質(zhì)量分?jǐn)?shù)X表示，單位為百分率（%），按式（1）計(jì)算： ……（1） 式中： m1 ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的待測(cè)液中總皂苷的質(zhì)量，單位為毫克（mg）； V1——制備試樣的體積，單位為毫升（mL）； m2 ——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）； V2 ——純化試樣的體積，單位為毫升（mL）。 所得結(jié)果應(yīng)保留至小數(shù)點(diǎn)后一位。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。 B _________________________________ _______________________________ 3