TAHFIA 004-2018 食品中總皂苷含量的測定 分光光度法.doc

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T/AHFIA 安徽省食品行業(yè)協(xié)會團體標準 T/AHFIA 004—2018 ????? 食品中總皂苷含量的測定 分光光度法 Determination of total saponins in Food Spectrophotometric method 2019 - 01 - 15實施 ??安徽省食品行業(yè)協(xié)會??????發(fā)布 2018 - 12 - 26發(fā)布 T/AHFIA 004—2018 前??言 本標準按照 GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。 本標準由安徽省食品行業(yè)協(xié)會提出并歸口。 本標準起草單位：安徽瑞思威爾科技有限公司、安徽古井貢酒股份有限公司、安徽潤安信科檢測科技有限公司。 本標準主要起草人：李安軍、王錄、劉國英、陸瑋、芮君君、劉智慧、何宏魁、楊恩賀。 I T/AHFIA 004—2018 食品中總皂苷含量的測定 分光光度法 A 1 范圍 本標準規(guī)定了食品中總皂苷含量的測定 分光光度法。 本標準適用于食品中總皂苷含量的測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 方法原理 本標準采用香草醛高氯酸分光光度法測定總皂苷含量。皂苷在強氧化性酸的作用下脫氫，再與香草醛加成顯色，形成特征的紫紅色化合物。在一定濃度范圍內，吸光度與皂苷類化合物的含量成正比，符合朗伯-比爾定律。 4 試劑與材料 4.1 試劑 4.1.1 無水乙醇：分析純。 4.1.2 香草醛：分析純。 4.1.3 冰醋酸：分析純。 4.1.4 高氯酸：分析純。 4.1.5 XAD-2大孔樹脂：純度≥98%。 4.1.6 無水氧化鋁：分析純。 4.1.7 水為符合 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。 4.2 試劑配制 4.2.1 香草醛冰醋酸溶液（5%）：精確稱取5 g（精確至0.0001 g）香草醛，用冰醋酸溶解定容至100 mL。 4.2.2 乙醇溶液（70%）：量取700 mL無水乙醇，用水溶解定容至1000 mL。 4.3 標準品 人參皂苷（Re，CAS號：52286-59-6），純度≥ 99.0%。 4.4 人參皂苷Re標準溶液配制 準確稱取20 mg（精確至0.1 mg）Re標準品，用70%乙醇溶解定容至50 mL，此溶液中人參皂苷含量為400 mg/L。于4℃冰箱中避光保存。 5 儀器與設備 5.1 紫外可見分光光度計：配1 cm比色皿。 5.2 分析天平：感量0.1 mg。 5.3 電熱恒溫水浴鍋：0℃~100℃。 5.4 玻璃層析柱：10 mm*40 cm（內徑*長度）。 6 分析步驟 6.1 試樣制備 6.1.1 固體試樣 稱取粉碎均勻的固體試樣5 g（精確至0.0001 g）于100 mL燒杯中，加入30 mL70%乙醇溶液，超聲30min，用70%乙醇溶液定容至50 mL容量瓶。離心至澄清，過濾備用。 6.1.2 液體試樣 精確吸取5.0 mL液體試樣于50 mL容量瓶中，用70%乙醇溶液定容，搖勻，備用。當稀釋后的試樣基質較復雜時，需過濾至澄清液備用。 6.2 樣品提取 6.2.1 層析柱的預處理 取適量樹脂于燒杯中，使用無水乙醇浸泡至覆蓋樹脂2.5 cm~5 cm，緩慢攪拌樹脂1min以充分混合，靜置2 h。倒出乙醇，用蒸餾水沖洗，直至無醇味。然后再用等量的無水乙醇洗滌，充分混合靜置20min，再用蒸餾水洗至無醇味。對活化后的樹脂進行分裝，每份樹脂質量為5 g，備用。 6.2.2 樣品純化 精確吸取2.0 mL制備的試樣加入5 g（精確至0.0001 g）活化后的樹脂中，搖勻，靜置30min。將加樣后的樹脂移入層析柱中，上加2 g（精確至0.0001 g）無水氧化鋁，用30 mL水洗柱，棄去洗脫液，再用30 mL70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于60℃水浴揮干。 6.3 測定 6.3.1 儀器條件 6.3.1.1 測定波長：545 nm。 6.3.1.2 比色皿：1 cm。 6.3.2 標準曲線的制作 準確吸取人參皂苷標準溶液（4.4）0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL分別置于蒸發(fā)皿中，于60℃水浴揮干，加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），轉動蒸發(fā)皿，使殘渣溶解，再加入1.6 mL高氯酸（4.1.4），混勻后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加熱20min，取出，冰浴冷卻2min，準確加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），搖勻后，以1 cm比色皿于545 nm波長處測定其吸光度。以皂苷質量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。 6.3.3 試樣溶液的測定 在6.2.2樣品純化后的蒸發(fā)皿中加入0.4 mL5%香草醛冰醋酸溶液（4.2.1），轉動蒸發(fā)皿，使殘渣溶解，再加入1.6 mL高氯酸（4.1.4），混勻后移入10 mL比色管中，70℃水浴上加熱20min，取出，冰浴冷卻2min，準確加入5.0 mL冰醋酸（4.1.3），搖勻后，在30min內以1 cm比色皿于545 nm波長處測定其吸光度。 7 分析結果表述 試樣中總皂苷的含量用質量分數(shù)X表示，單位為百分率（%），按式（1）計算： ……（1） 式中： m1 ——由標準曲線計算得出的待測液中總皂苷的質量，單位為毫克（mg）； V1——制備試樣的體積，單位為毫升（mL）； m2 ——樣品的質量，單位為克（g）； V2 ——純化試樣的體積，單位為毫升（mL）。 所得結果應保留至小數(shù)點后一位。 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。 B _________________________________ _______________________________ 3