浮游植物光合作用活性測(cè)定 葉綠素?zé)晒夥ǎ▓?bào)批稿）

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ICS 07.100.20Z 17DB 21遼 寧 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB 21/ XXXXX—XXXX浮游植物光合作用活性測(cè)定 葉綠素?zé)晒夥?Photochemical vitality of phytoplankton determination ? Chlorophyll fluorescence （報(bào)批稿）（本稿完成日期：2018.12.28）XXXX - XX - XX 發(fā)布 XXXX - XX - XX 實(shí)施遼 寧 省 市 場(chǎng) 監(jiān) 督 管 理 局 發(fā) 布DB21/ XXXXX—XXXXI前 言本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)GB/T 1.1-2009 《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》給出的規(guī)則制定的。 本標(biāo)準(zhǔn)由大連市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：柴雨、董婧、趙慧慧、許鵬、杜萌萌、郭愛(ài)娟、孫明、段妍、王彬、王愛(ài)勇、李軼平、郭棟、于旭光、劉修澤、李玉龍。DB21/ XXXXX—XXXX1浮游植物光合作用活性測(cè)定 葉綠素?zé)晒夥?1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了利用葉綠素?zé)晒夥y(cè)定自然水樣中浮游植物光合活性的原理、樣品的采集與保存、儀器設(shè)備與器具、測(cè)定步驟等。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于含有活體藻細(xì)胞的自然水樣的光合活性測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 GB/T 12763.6 海洋調(diào)查規(guī)范 第6部分：海洋生物調(diào)查 GB 17378.3 海洋監(jiān)檢測(cè)規(guī)范 第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸 GB 17378.7 海洋監(jiān)檢測(cè)規(guī)范 第7部分：近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測(cè) SC/T 9402 淡水浮游生物調(diào)查技術(shù)規(guī)范 3 術(shù)語(yǔ)和定義 下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。 3.1 最大光化學(xué)量子產(chǎn)量 maximum photochemical quantum yield of PSⅡ 測(cè)定的浮游植物的細(xì)胞通過(guò)光量子能固定的二氧化碳分子數(shù)或者釋放出的氧氣分子數(shù)，反映藻細(xì)胞的潛在最大的光合效率，即“生長(zhǎng)潛能”。 3.2 實(shí)際光化學(xué)量子產(chǎn)量 effective photochemical quantum yield of PS Ⅱ 在目前的光照下，測(cè)定的浮游植物的細(xì)胞光量子能固定的二氧化碳分子數(shù)或者釋放出的氧氣分子數(shù)，反映藻細(xì)胞目前的光合效率。 3.3 非化學(xué)光淬滅 non-photochemical quenching 植物耗散過(guò)剩光能為熱的能力，也就是光保護(hù)能力。 4 方法原理 DB21/ XXXXX—XXXX2浮游植物在吸收光能后會(huì)進(jìn)行光合作用同時(shí)產(chǎn)生葉綠素?zé)晒夂蜔?，通過(guò)測(cè)定葉綠素?zé)晒饪梢杂?jì)算出浮游植物的光合作用。本標(biāo)準(zhǔn)使用調(diào)制熒光儀對(duì)海水中的浮游植物的光合作用活性進(jìn)行測(cè)定。樣品為含有活體藻細(xì)胞的自然海水。使用葉綠素調(diào)制熒光儀進(jìn)行樣本葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線，計(jì)算得出浮游植物的最大光量子產(chǎn)量及實(shí)際光量子產(chǎn)量。 5 樣品的采集與保存 5.1 樣品的采集 使用采水器采集樣品于1000 mL廣口玻璃樣品瓶中（采水樣品），海水樣品采集方法按 GB 17378.3 規(guī)定執(zhí)行，采樣數(shù)量按照 GB 17378.7 及 GB/T 12763.6執(zhí)行。淡水樣品的采集方法及數(shù)量按照SC/T 9402執(zhí)行。 5.2 樣品的保存 現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行藻類光合活性的測(cè)定，水樣搖勻后用移液器移取自然水樣測(cè)定。若樣品需帶回實(shí)驗(yàn)室測(cè)量，采集后將樣品密閉送至實(shí)驗(yàn)室并于24 h內(nèi)測(cè)定分析。 6 儀器設(shè)備與器具 6.1 可測(cè)定浮游植物的葉綠素?zé)晒鈨x；操作溫度范圍：-5℃～+40 ℃；適用電源：充電式密封鉛酸電池，12 V/2 A。 6.2 過(guò)濾器：0.2μm；石英比色杯；移液器：2 ml；擦鏡紙；采水器；1000 mL 廣口玻璃樣品瓶。 7 測(cè)定步驟 7.1 儀器校正 7.1.1 過(guò)濾水樣 采用 0.2 μm 水樣過(guò)濾器過(guò)濾相應(yīng)水樣，去除水樣中的藻類。 7.1.2 用三級(jí)水清洗石英杯，去除杯壁殘留所導(dǎo)致的背景熒光信號(hào)。試驗(yàn)用水均為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。 7.1.3 用移液器移取 2 ml 過(guò)濾后的水樣放入比色杯，用擦鏡紙將比色杯外側(cè)擦拭干凈后放入葉綠素調(diào)制熒光儀。選擇調(diào)零“Z off”并在測(cè)量時(shí)全程打開(kāi)。 7.2 樣品稀釋 當(dāng)水樣的葉綠素濃度高于300 μg/L時(shí)，葉綠素分子對(duì)熒光的“重吸收”會(huì)干擾測(cè)量結(jié)果。為避免這種影響，當(dāng)測(cè)量出的葉綠素含量高于300μg/L時(shí)，請(qǐng)對(duì)樣品采用三級(jí)水稀釋后重新測(cè)量。藻類濃度以肉眼看不出顏色為宜。 7.3 樣品測(cè)定 7.3.1 搖勻待測(cè)水樣，用移液器移取 2 mL 水樣放入比色杯，用擦鏡紙將比色杯外側(cè)擦拭干凈后放入葉綠素調(diào)制熒光儀。 7.3.2 用將含有待測(cè)樣品的比色杯經(jīng)過(guò)暗適應(yīng) 20 min，打開(kāi)光通量密度很弱的測(cè)量光獲得初始熒光Fo，然后打開(kāi)飽和脈沖光獲得最大熒光 Fm。 DB21/ XXXXX—XXXX37.3.3 然后打開(kāi)恒定的可見(jiàn)光，得到可見(jiàn)光條件下的葉綠素?zé)晒庵?Fs，并每隔 20 s 打開(kāi)飽和脈沖光，得到可見(jiàn)光條件下的最大葉綠素?zé)晒庵?Fm’，從而獲得葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線，參見(jiàn)附錄 A。 8 結(jié)果與計(jì)算 8.1 最大光化學(xué)量子產(chǎn)量計(jì)算公式 ………………………………………………………(1)FvFm=Fm-FoFm式(1)中： Fo ???? 為樣品最小葉綠素?zé)晒庵?；Fm ???? 為樣品最大葉綠素?zé)晒庵担????? 為樣品的最大光化學(xué)量子產(chǎn)。 ????????8.2 實(shí)際光化學(xué)量子產(chǎn)量計(jì)算公式 ……………………… ……………………………(2)式(2)中： Fm’ ???? 代表光適應(yīng)的樣品打開(kāi)飽和脈沖時(shí)得到的最大葉綠素?zé)晒庵担?Fs ???? 代表某一光照條件下打到的穩(wěn)態(tài)的葉綠素?zé)晒庵担????? 代表穩(wěn)態(tài)光照下的光化學(xué)量子產(chǎn)量 ???????'8.3 非光化學(xué)淬滅 ……………………… ……………………………(3)??????=Fm-Fm'Fm'式(3)中： Fm ???? 為樣品最大葉綠素?zé)晒庵担?Fm’ ???? 代表光適應(yīng)的樣品打開(kāi)飽和脈沖時(shí)得到的最大葉綠素?zé)晒庵?NPQ ????植物耗散過(guò)剩光能為熱的能力，也就是光保護(hù)能力。DB21/ XXXXX—XXXX4A A附 錄 A（資料性附錄）葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線 圖 A.1 葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線 _________________________________