LST 6120-2017 糧油檢驗 植物油中角鯊烯的測定 氣相色譜法 doc版 僅供參考

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ICS? 67.040X 04 LS中 華 人 民 共 和 國 糧 食 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)LS/T 6120—2017糧油檢驗 植物油中角鯊烯的測定 氣相色譜法Inspection of grain and oils—Determination of squalene in vegetable oil by gas chromatography2017- 09 - 15 發(fā)布 2017 - 09 - 15 實施國  家  糧  食  局   發(fā) 布LS/T 6120—2017I前  言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家糧食局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國糧油標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAC/TC 270）歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國家糧食局科學(xué)研究院、國家林業(yè)局國有林場和林木種苗工作總站、中紡糧油進(jìn)出口有限責(zé)任公司、北京市營養(yǎng)源研究所、中糧食品營銷有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：朱琳、薛雅琳、楊超、趙兵、張超英、張東、劉寶珍、崔亞娟、安駿。  LS/T 6120—20171糧油檢驗 植物油中角鯊烯的測定 氣相色譜法1　范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了氣相色譜法測定植物油中角鯊烯含量的原理、試劑、儀器、試樣制備、操作步驟、結(jié)果表示和精密度等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物油中角鯊烯含量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限為5mg/kg。2　規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6379.1 測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度） 第1部分：總則與定義GB/T 6379.2 測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法GB/T 15687 動植物油脂 試樣的制備3　原理樣品經(jīng)氫氧化鉀-乙醇溶液皂化、正己烷提取后，采用氣相色譜法，以角鯊?fù)闉閮?nèi)標(biāo)測定植物油中角鯊烯的含量。4　試劑除非另有說明，在分析中應(yīng)使用分析純試劑，水為GB/T 6682推薦使用的二級水。4.1　氫氧化鉀。4.2　95%乙醇。4.3　無水乙醇。4.4　正己烷：色譜純。4.5　氫氧化鉀-乙醇溶液（約 1mol/L）：稱取 60g±0.1g 氫氧化鉀（4.1），加入 50mL 的水進(jìn)行溶解，然后用乙醇（4.2）稀釋至 1000mL，溶液應(yīng)為無色或淺黃色。4.6　10%乙醇溶液：用量筒量取 50mL 乙醇（4.3）于 500mL 容量瓶中，用水定容至刻度。4.7　無水硫酸鈉。LS/T 6120—201724.8　角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。4.9　角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。4.10　角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液：準(zhǔn)確稱取 25mg（精確至 0.0001g）角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)品（4.8）于 25mL 容量瓶中，加入少量正己烷（4.4），使其充分溶解后，用正己烷（4.4）定容至刻度，搖勻，即配成 1mg/mL 角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液。4.11　角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取 50mg（精確至 0.0001g）角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品（4.9）于 50mL 容量瓶中，加入少量正己烷（4.4），使其充分溶解后，用正己烷（4.4）定容至刻度，搖勻，即配成 1mg/mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4.12　配制含 30μg/mL 角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)的角鯊烯工作液：將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.11）用正己烷（4.4）稀釋至濃度分別為 2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，并在工作液中加入適量的角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液（4.10），保證每個工作液中角鯊?fù)榻K濃度為30μg/mL。4.13　pH 試紙:指示范圍 1～14。5　儀器5.1　圓底燒瓶：帶標(biāo)準(zhǔn)磨口的 250mL 圓底燒瓶。5.2　回流冷凝管：具有與燒瓶（5.1）配套的磨口。5.3　250mL 分液漏斗：具用聚四氟乙烯旋塞。5.4　恒溫水浴鍋。5.5　渦旋振蕩器。5.6　分析天平：精度 0.0001g。5.7　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5.8　氮吹儀。5.9　氣相色譜儀：配 FID 檢測器。6　試樣制備按GB/T 15687執(zhí)行。7　操作步驟7.1　樣品處理7.1.1　稱量：準(zhǔn)確吸取 300μL 角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)溶液（4.10）于 250mL 圓底燒瓶（5.1）中，在氮吹儀上吹干后，準(zhǔn)確稱取 0.2g~2g 樣品（6）（精確至 0.0001g）于此燒瓶中。LS/T 6120—201737.1.2　皂化：于燒瓶（7.1.1）中加入 50mL 氫氧化鉀-乙醇溶液（4.5）后，燒瓶與回流冷凝管（5.2）連接好，在 80℃恒溫水浴鍋（5.4）中皂化回流 50min，停止加熱，從回流管頂部加入 50mL 水，取出燒瓶搖勻，冷卻至室溫。7.1.3　提?。簩恐械脑砘恨D(zhuǎn)移至 250mL 分液漏斗（5.3）中，用 50mL 正己烷（4.4）分三次洗滌燒瓶，并將洗滌液倒入分液漏斗中，用力搖動分液漏斗 2min，倒轉(zhuǎn)分液漏斗，并小心打開旋塞，間歇地釋放壓力，靜置分層，將下層皂化液轉(zhuǎn)移至另一個 250mL 分液漏斗中，再用相同的方法，分別用30mL、20mL 正己烷（4.4）對皂化液再提取兩次，將三次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。7.1.4　洗滌：用 25mL 乙醇溶液（4.6）洗滌正己烷提取液三至四次，每次棄去下層的乙醇水溶液，用pH 試紙（4.13）檢驗直至下層流出液呈中性。注 1：第一次用乙醇溶液洗滌時要輕搖，防止乳化，逐次振搖強(qiáng)度可增加。如出現(xiàn)乳化層，可噴淋少量的無水乙醇。7.1.5　濃縮：將洗至中性的正己烷提取液經(jīng)過鋪有約 5g 無水硫酸鈉（4.7）的濾紙濾入與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（5.7）配套的球形蒸發(fā)瓶中，再用約 20mL 的正己烷沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉三次，并入蒸發(fā)瓶中，在 40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑，待瓶中剩下約 2mL 正己烷時，取下蒸發(fā)瓶，立即放入氮吹儀（5.8）中吹干，最后用正己烷（4.4）溶解并定容至 10mL，待測。7.2　色譜參考條件氣相色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱，柱長30m，內(nèi)徑0.32 mm，膜厚0.25μm；載氣：高純氮氣，純度99.999%；恒壓，16psi；分流比：1:10；進(jìn)樣口溫度：250℃；柱溫采用程序升溫方式，以15℃/min的速率從160℃升溫到220℃，保持2min，然后以5℃/min的速率升溫到280℃，保持20min；最后以5℃/min的速率升溫到300℃，保持2min。FID檢測器：溫度300℃，氫氣流速40mL/min，空氣流速450mL/min，尾吹氣流速30mL/min。進(jìn)樣量：1.0μL。也可采用其他等效的毛細(xì)管柱或色譜條件。7.3　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將含有30μg/mL角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)的不同濃度角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.12）注入氣相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄角鯊烯和角鯊?fù)榈姆迕娣e。以二者峰面積比為橫坐標(biāo)，以二者質(zhì)量比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率即為角鯊烯和角鯊?fù)榈男Ｕ蜃觙。7.4　樣品測定將樣品待測溶液（7.1.5）注入氣相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄樣品中角鯊烯和角鯊?fù)榉迕娣e。根據(jù)樣品測試溶液的角鯊烯和角鯊?fù)榈姆迕娣e比、內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量及角鯊烯和角鯊?fù)榈男Ｕ蜃?，計算出樣品待測液角鯊烯的質(zhì)量。如果樣品測試溶液的角鯊烯和角鯊?fù)榉迕娣e比未落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，應(yīng)適當(dāng)調(diào)整待測樣品的稱樣質(zhì)量，再重新進(jìn)行測定。8　結(jié)果表示樣品中角鯊烯的含量（ X） 按式（1）計算：LS/T 6120—20174................................(1)101??fmAXsS式中：X——樣品中角鯊烯的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A1——樣品中角鯊烯的峰面積；AS——樣品中內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)榈姆迕娣e；mS——樣品中加入內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)榈馁|(zhì)量，單位為微克（μg）；f——角鯊烯和角鯊?fù)榈男Ｕ蜃?；m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）。結(jié)果保留小數(shù)點后一位。9　精密度9.1　重復(fù)性在重復(fù)條件下獲得的兩個獨立測試結(jié)果的絕對差值小于等于重復(fù)性限（ r）的情況應(yīng)大于95%。角鯊烯含量的重復(fù)性限（ r）參見附錄A。9.2　再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個獨立測試結(jié)果的絕對差值小于等于再現(xiàn)性限（ R）的情況應(yīng)大于95%。角鯊烯含量的再現(xiàn)性限（ R）參見附錄A。LS/T 6120—20175附 錄 A（資料性附錄）實驗室間比對試驗統(tǒng)計結(jié)果組織 11 家實驗室對 7 個不同樣品進(jìn)行實驗室間比對試驗，建立了本方法的精密度。結(jié)果按 GB/T 6379.1 和 GB/T 6379.2 統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結(jié)果見表 A.1。表 A.1  實驗室間比對試驗統(tǒng)計結(jié)果樣  品 1 2 3 4 5 6 7實驗室數(shù)目 11 11 11 11 11 11 11參加統(tǒng)計實驗室數(shù)目 11 11 10 10 11 10 11離群實驗室數(shù)目 0 0 1 1 0 1 0平均值/(mg/kg) 40.27 46.91 247.10 1960.27 4951.85 5677.30 7760.05重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差， Sr 0.79 1.63 7.92 35.10 170.94 64.18 71.89重復(fù)性限， r 2.21 4.56 22.17 98.29 478.63 179.71 201.28重復(fù)性變異系數(shù)/% 1.96 3.47 3.20 1.79 3.45 1.13 0.93再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差， SR 10.69 5.85 18.18 200.29 625.59 632.14 736.51再現(xiàn)性限， R 29.92 16.39 50.91 560.81 1751.65 1769.99 2062.24再現(xiàn)性變異系數(shù)/% 26.54 12.48 7.36 10.22 12.63 11.13 9.49LS/T 6120—20176附 錄 B（資料性附錄）角鯊烯和內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)色譜圖_________________________________