外泌體之家-筆記.doc

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外泌體之家筆記 外泌體簡介 Exosome，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結構，直徑大約40-100 nm。盡管外泌體最初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而最近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。最近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、腫瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結構，能很好的保護其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細胞或組織，因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)（targeted delivery system）。 2015年，隨著精準醫(yī)學概念的提出，越來越多的人開始關注如何能做到疾病的精確診斷和治療。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的廣泛性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷治療的潛在有效方式，在精準醫(yī)學發(fā)展上有著光明的前景。 綜述 Cell：外泌體的研究現(xiàn)狀與未來方向--CQ 雖然，已有初步研究結果解釋外泌體在體內(nèi)的運輸途徑。但關于，其介導的細胞間的信號傳導的功能研究仍需要一些實質(zhì)性的研究來解釋。在這篇綜述中，作者以腫瘤細胞及其微環(huán)境為背景，認為癌細胞分泌的外泌體對癌癥的發(fā)生及惡化起著重要的媒介調(diào)控作用。 在這篇Cell文章中，作者首先總結了目前外泌體最引人注目的功能研究：1）外泌體攜帶的蛋白促進了腫瘤進展和轉移；2）外泌體的分泌、運輸途徑等傳遞信號通路；3）外泌體中的小RNA具有什么作用；4）外泌體對腫瘤免疫的影響，以及對腫瘤抗放療、抗化療的影響。 然后還介紹了對外泌體的功能了解存在著哪些局限，比如說，外泌體存在著眾多子類，怎么從物理、生化上區(qū)分開，比如說不同類型的外泌體存在哪些不同的生物標志物，已及從生理學功能上區(qū)分不同類型的外泌體仍存在很多難題。 腫瘤 免疫 干細胞 心血管 診斷 靶向給藥 方法組學 分泌機制 方法及組學 Nanoscale：一種能高純度捕獲和釋放外泌體的微流體裝置 目前，最好的分離外泌體的金標準方法仍然是超速離心法，通常得率較低（5％至25％）。其它方法，如基于聚合物的分離試劑盒，會非特異性地沉淀下所有外泌體大小的物質(zhì)，需要額外步驟去除雜質(zhì)，且價格昂貴。 研究人員設計了一種微流體裝置，用于捕獲血液中的外泌體。該裝置含有兩個不同的免疫模塊層，通過抗體與外泌體結合實現(xiàn)高通量特異性分離，并且能夠通過機械旋轉來增強抗體和外泌體之間結合的機會。此外，還會對分離下來的外泌進行去抗體處理，使外泌體恢復原狀，有利于下游的分析。 研究人員使用MCF-7分泌的外泌體驗證了本裝置的性能，發(fā)現(xiàn)分離出來的濃度和比例均高于常規(guī)試劑盒。這種簡單快速的外泌體捕獲技術對闡明癌癥患者外泌體的功能具有很大的潛力，因此可以應用于各種基于外泌體的癌癥研究。 參考文獻: Kang YT, Kim YJ, Bu J, Cho YH, Han SW, Moon BI. High-purity capture and release of circulating exosomes using an exosome-specific dual-patterned immunofiltration (ExoDIF) device. Nanoscale. 2017 Sep 1. 腫瘤 促進增殖 促進轉移 免疫逃逸或免疫殺傷 【綜述】外泌體及miRNA在腫瘤耐藥中的作用 在化療過程中，癌細胞能產(chǎn)生耐藥性，主要是通過降低細胞膜的藥物通透性和增強細胞對藥物的外排作用實現(xiàn)的。癌細胞能通過外泌體的形式向外排出化療藥物而使化療藥物失效。外泌體miRNA如何在腫瘤微環(huán)境中“幫助”腫瘤產(chǎn)生耐藥性，尚未得到充分的研究和闡述。在這篇綜述里，研究人員著重介紹關于外泌體介導的miRNA遞送在調(diào)控耐藥性方面的研究。研究人員還認為外泌體可作為對抗耐藥性的新方法。 Bach DH, Hong JY, Park HJ, Lee SK. The role of exosomes and miRNAs in drug-resistance of cancer cells. Int J Cancer. 2017 Jul 15;141(2):220-230. NK細胞外泌體的抗腫瘤作用 來自韓國慶北國立大學醫(yī)學院的Byeong-Cheol Ahn研究組發(fā)現(xiàn)NK細胞外泌體對黑色素瘤細胞具有細胞毒作用。值得進一步將其發(fā)展為癌癥的潛在免疫治療策略。 該研究發(fā)現(xiàn)，NK細胞外泌體對黑色素瘤細胞具有細胞毒性，但是對正常細胞無影響。通過FasL 抑制劑可減輕其對黑色素瘤細胞的細胞毒性。NK細胞外泌體在體外誘導了黑色素瘤細胞的凋亡。接著，研究人員利用小鼠模型在體內(nèi)檢測了NK細胞外泌體的腫瘤抑制作用，發(fā)現(xiàn)NK細胞外泌體處理組的腫瘤大小顯著小于對照組。 是來自南加利福尼亞大學的研究人員，介紹了活化的人NK細胞的胞外囊泡的大規(guī)模分離及其細胞毒性作用。使用聚合物沉淀結合密度梯度離心的方法分離EV。 1. Zhu, L., et al. (2017). "Exosomes Derived From Natural Killer Cells Exert Therapeutic Effect in Melanoma." Theranostics 7(10): 2732-2745. 2. Jong, A. Y., et al. (2017). "Large-scale isolation and cytotoxicity of extracellular vesicles derived from activated human natural killer cells." J Extracell Vesicles 6(1): 1294368. MD安德森癌癥中心發(fā)文：膠質(zhì)瘤相關MSC分泌的外泌體增強膠質(zhì)瘤干細胞的致癌性 研究表明，癌細胞分泌外泌體中的原癌miRNA的轉移可以改變非癌細胞的生物學特性，而腫瘤抑制性miRNA的轉移可以抑制腫瘤生長。 在此前一項研究中，膠質(zhì)瘤細胞分泌含有mRNA和miRNA的外泌體，促進血管形成。膠質(zhì)瘤的細胞外囊泡將miR-1遞送至受體細胞，改變了膠質(zhì)瘤細胞侵襲和增殖特性并且影響基質(zhì)細胞促進內(nèi)皮細管的形成。另有研究認為，GBM衍生的外泌體可將miRNA轉移至小神經(jīng)膠質(zhì)細胞中。 來自MD安德森癌癥中心Frederick Lang研究團隊的研究人員認為 神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關的人類間充質(zhì)干細胞（GA-hMSC）————膠質(zhì)母細胞瘤的基質(zhì)成分，能夠釋放外泌體，增加腫瘤起始膠質(zhì)瘤干細胞（GSCs）的增殖和克隆形成。研究人員分析了外泌體內(nèi)容物，鑒定出miR-1587是GSCs外泌體的作用介質(zhì)，其中部分機理是可下調(diào)腫瘤抑制性核受體共抑制因子NCOR1。 【Cell】腫瘤細胞迫使基質(zhì)細胞通過外泌體釋放無蛋白結合的RNA RN7SL1促進腫瘤的生長和轉移 乳腺癌細胞觸發(fā)基質(zhì)細胞NOTCH-MYC信號通路導致POL3驅動的RN7SL1增加。在外泌體轉移到免疫細胞后，非屏蔽的RN7SL1觸發(fā)炎癥反應；轉移到乳腺癌細胞后，非屏蔽RN7SL1激活PRR RIG-1以增強腫瘤生長、轉移和治療抗性。 Highlights 胞質(zhì)RNA被RNA結合蛋白屏蔽從而抑制RIG-I的識別 腫瘤成纖維細胞中NOTCH-MYC信號通路促進非屏蔽的RN7SL1 RNA通過外泌體釋放 外泌體中的非屏蔽RN7SL1作為DAMP 激活乳腺癌的RIG-I RNA的非屏蔽與基質(zhì)激活協(xié)同促進炎癥和腫瘤進展 Nabet B Y, Qiu Y, Shabason J E, et al. Exosome RNA Unshielding Couples Stromal Activation to Pattern Recognition Receptor Signaling in Cancer[J]. Cell, 2017, 170(2): 352-366. e13. Matei I, Kim H S, Lyden D. Unshielding Exosomal RNA Unleashes Tumor Growth And Metastasis[J]. Cell, 2017, 170(2): 223-225. Nature：腦微環(huán)境通過外泌體microRNAs促進腫瘤轉移---CQ 相同來源的腫瘤細胞轉移到不同的器官后會顯示出不同的基因表達譜。顯然，轉移的腫瘤細胞和外在信號之間在轉移器官的動態(tài)相互作用影響其轉移后的生長。 這篇研究文章揭示了正常表達PTEN（一種重要的腫瘤抑制因子）的人和小鼠的腫瘤細胞在傳播到腦部后丟失PTEN的表達，但是傳播到其他器官后不會。在轉移到腦后丟失PTEN的腫瘤細胞在離開腦部微環(huán)境后PTEN的表達水平會得到恢復。這種腦微環(huán)境依賴的、可逆的PTEN mRNA和蛋白下調(diào)是有腦部星型膠質(zhì)細胞來源的microRNAs調(diào)控的。星型膠質(zhì)細胞來源的exosome介導了與轉移腫瘤細胞之間的靶向PTEN的microRNAs的傳遞。體內(nèi)實驗證明，星型膠質(zhì)細胞特異性敲除靶向PTEN的microRNAs或者阻斷星型膠質(zhì)細胞分泌exosome可恢復PTEN并抑制腦部的轉移。此外，這種適應性腦轉移腫瘤細胞的PTEN丟失導致趨化因子CCL2分泌的增加，招募表達IBA1表達的骨髓來源的細胞，從而通過增加繁殖和抑制凋亡來相互促進腦轉移腫瘤細胞的生長。 Nature：外泌體整合素分子決定了腫瘤轉移的器官傾向性--CQ 研究表明被特定器官的細胞獲取的腫瘤外泌體可為腫瘤的轉移準備轉移前微環(huán)境。用肺轉傾向的腫瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可是骨轉傾向的腫瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)不同器官傾向性的腫瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉有關，而整合素αvβ5與肝轉有關。Knock down整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶器官細胞獲取，進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后激活了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。最后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素和作為預測腫瘤轉移的器官傾向性的診斷指標。 外泌體讓癌中之王露出蛛絲馬跡--CQ 來自美國M.D. Anderson Cancer Center研究者們通過大量的胰腺癌病人血清樣本分析發(fā)現(xiàn)，相較正常人而言，胰腺癌病人血清中GPC1（glypican-1）陽性的exosome占比顯著增高。進一步研究發(fā)現(xiàn)，GPC1陽性exosome在早期胰腺癌病人的血清中豐度就顯著高于正常人群，這一發(fā)現(xiàn)為胰腺癌的前期診斷提供了十分重要的依據(jù)，為胰腺癌病人帶來了福音，也可能會對胰腺癌的診斷帶來顛覆性的改變。 Nature：Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer. 胰腺癌診斷標志物，外泌體miRNA要優(yōu)于GPC-1 CP容易可能被誤診為PDAC從而導致患者不必要的胰腺切除。因此，早期PDAC診斷和PDAC和CP之間的明確鑒別是至關重要的。研究人員比較正常對照志愿者和PDAC和CP患者的外泌體磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1（exosomal GPC-1）和miRNA水平。研究人員發(fā)現(xiàn)GPC-1并不是PDAC的診斷標志物，而PDAC患者的外泌體microRNA-10b（miR-10b）、miR-21、miR-30c和miR-181a的高表達和miR-let7a的低表達可以容易地將PDAC與正常人和CP患者分開。與GPC1相比，在PDAC患者進行胰腺切除后24小時內(nèi)，升高的外泌體miRNA水平會降低至正常值。所有29例PDAC病例均顯示出顯著升高的外泌體miR-10b和miR-30c水平，但是其中有8例卻具有正?；蚵晕⒃黾拥腃A19-9水平。因此，研究人員認為外泌體miRNA作為PDAC標志物的診斷方式要優(yōu)于外泌體GPC1或血漿CA19-9水平，并發(fā)現(xiàn)了PDAC和CP的診斷差異。 參考文獻：Lai X, Wang M, McElyea SD, Sherman S, House M, Korc M. A microRNA signature in circulating exosomes is superior to exosomal glypican-1 levels for diagnosing pancreatic cancer. Cancer Lett. 2017 May 1;393:86-93. Cell：exosome從基質(zhì)細胞轉移到乳腺癌細胞調(diào)節(jié)其治療的耐受性--CQ 來自賓夕法尼亞大學的研究人員在Cell上發(fā)表了關于exosome從基質(zhì)細胞轉移到乳腺癌細胞從而調(diào)節(jié)其治療的耐受性通路的最新研究成果。 該研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)細胞和乳腺癌細胞利用旁分泌（paracrine）和近分泌（juxtacrine）信號來啟動化療和放療的耐受性。 在這中復雜的相互作用中，exosome從基質(zhì)細胞轉移到乳腺癌細胞。Exosome中的RNA成分，大部分是非編碼轉錄本和可轉移元件，促進RIG-I受體的識別，從而激活STAT1依賴的抗病毒信號通路。與此同時，基質(zhì)細胞也能激活乳腺癌細胞的NOTCH3。這種旁分泌的抗病毒作用和近分泌NOTCH3信號通路在STAT1匯合從而促進NOTCH3的轉錄反應和治療耐受的腫瘤起始細胞的繁殖。這種作用能被gamma分泌酶抑制劑廢除。因此，基質(zhì)細胞利用exosome來介導抗病毒信號參與了一個錯綜復雜的與乳腺癌細胞的相互作用。這能夠使乳腺癌耐受治療并重新起始腫瘤的生長。 Nature子刊】天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院巴一教授、應國光教授：外泌體傳遞EGFR調(diào)節(jié)肝臟微環(huán)境促進胃癌肝轉移 自“種子與土壤”假說以來，轉移的器官傾向性一直是癌癥最大的奧秘之一。盡管EGFR在癌細胞中的作用得到了很好的研究，但由外泌體轉運的分泌的EGFR的作用的研究較少。來自天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院的巴一教授、應國光教授在最新的Nature Communications雜志上報道了EGFR在胃癌細胞分泌的外泌體可以被遞送到肝臟并且整合在肝臟基質(zhì)細胞的質(zhì)膜上。通過抑制miR-26a/b表達，證實易位的EGFR能有效激活肝細胞生長因子（HGF）。此外，結合遷移的癌細胞上的c-MET受體的上調(diào)的旁分泌HGF為“種子”提供了肥沃的“土壤”，促進轉移性癌細胞的著陸和增殖。因此，該研究提出衍生自癌細胞的含有EGFR的外泌體有利于促進肝臟特異性轉移的肝樣微環(huán)境的發(fā)展。 Exosome-delivered EGFR regulates liver microenvironment to promote gastric cancer liver metastasis. Nat Commun. 2017 Apr 10;8:15016. doi: 10.1038/ncomms15016. IF=11.329 Nature Communications：衰老細胞分泌小囊泡促進癌細胞增殖 免疫 【重磅】Nature：下丘腦干細胞分泌外泌體延緩衰老 在2013年，蔡教授的研究團隊曾已在Nature雜志上發(fā)表過一篇題為“Hypothalamic Programming of Systemic Aging Involving IKKβ/NF-κB and GnRH”，認為下丘腦具有引起全身衰老的程序性作用。下丘腦對于小鼠全身衰老的發(fā)展至關重要，其機理包括由IκB激酶-β（IKK-β）、核因子κB（NF-κB）和相關小膠質(zhì)細胞介導的下丘腦免疫神經(jīng)元免疫間的相互作用。通過阻止衰老相關的下丘腦或腦IKK-β和NF-κB的激活，能夠在小鼠中實現(xiàn)延遲衰老進程并延長壽命。IKK-β和NF-κB抑制促性腺激素釋放激素（GnRH）使衰老相關的下丘腦GnRH下降，GnRH的治療可以改善神經(jīng)發(fā)生并減緩衰老。總之，下丘腦通過免疫神經(jīng)內(nèi)分泌間的相互作用，在衰老發(fā)生中具有程序性作用。 在本研究中，蔡教授的研究團隊設計了幾種小鼠模型，他們將共表達有Sox2和Bmi1兩個基因的下丘腦神經(jīng)干細胞/祖細胞（htNSCs）消融殺死，他們發(fā)現(xiàn)，隨著這些下丘腦干細胞的消失，小鼠開始出現(xiàn)衰老癥狀。每個小鼠模型都表現(xiàn)出來了衰老相關的生理變化或者壽命的縮短。相反，中年小鼠中植入經(jīng)過改造的健康的下丘腦干細胞/祖細胞后，小鼠的衰老癥狀延遲并且壽命延長，并且這些經(jīng)改造后的下丘腦干細胞可以在衰老相關的下丘腦炎癥微環(huán)境下存活。 在機制上，下丘腦干細胞/祖細胞會將外泌體微小RNA（miRNA）分泌到腦脊液中，而這些外泌體miRNA在衰老過程中會下調(diào)，而用健康的下丘腦干細胞/祖細胞分泌的外泌體的治療便能夠減慢衰老進程。綜上所述，機體衰老的速度基本上是由下丘腦干細胞所控制的，而該過程一部分是下丘腦干細胞通過釋放外泌體miRNA的來實現(xiàn)的。 靶向給藥 【Nature新聞綜述推薦】利用外泌體靶向KRAS治療胰腺癌 KRAS的原癌突變通常在胰腺導管腺癌中發(fā)生，KRAS突變會促使腫瘤起始、增殖、進展和轉移。在今年6月，Nature雜志曾發(fā)表了一篇文章 (http://www.exosomemed.com/3085.html)，利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRAS G12D，從而特異性高效靶向至胰腺癌細胞，以顯著降低RAS活化、癌細胞增殖和轉移過程。 藥物遞送丨工程化巨噬細胞外泌體裝載紫杉醇，可有效靶向肺轉移部位 非小細胞肺癌（NSCLC），占所有肺癌的85％，而且轉移性NSCLC的預后很差；化療后生存率只有很小的提高，五年存活率低于15％。 已知免疫細胞來源的外泌體會表達CD47受體，其與信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）相互作用，能在吞噬細胞中產(chǎn)生“不吃我”的信號。這些獨特的功能使外泌體成為用作癌癥治療藥物遞送載體的有吸引力的選擇。 已經(jīng)表明，包括NSCLC的各種癌癥類型，都會過表達膜結合蛋白sigma受體，其功能尚不清楚。氨基乙基乙醇胺（aminoethylanisamide，AA）是sigma受體的高親和力的配體，已被用于靶向遞送Dox、蛋白質(zhì)和siRNA。然后，減少納米藥物免疫原性的最常見的方法是將納米顆粒用聚乙二醇（PEG）修飾，這會減少單核吞噬細胞系統(tǒng)(MPS)的識別并有助于避免被清除。并且發(fā)現(xiàn)，向外泌體中引入聚乙二醇，能顯著增加了外泌體在小鼠體內(nèi)的循環(huán)時間。 基于這些發(fā)現(xiàn)，研究人員認為，用PEG-AA載體修飾裝載有紫杉醇的外泌體，將改善藥物在血液中的循環(huán)時間并能夠靶向肺轉移。與非載體修飾的exoPTX和紫杉醇相比，研究顯示AA-外泌體的系統(tǒng)性給藥，能在肺轉移部位積累以及共定位，并且有更好的治療效果。因此，將納米顆粒、靶向藥物遞送和低免疫原性特征結合起來，外泌體藥物能夠成為下一代的藥物遞送系統(tǒng)。 診斷 上海交大生命學院：人唾液和血清外泌體蛋白質(zhì)組的系統(tǒng)比較并用于肺癌檢測 來自上海交通大學生命科學與技術學院的曹成喜和肖華課題組的研究人員在Analytica Chimica Acta雜志發(fā)表論文，系統(tǒng)的比較了血清和唾液中外泌體的蛋白質(zhì)組。在進行外泌體分離之前，首先需要除去這些體液中的高豐度雜蛋白質(zhì)，分離提取外泌體，并通過形態(tài)學分析和表面生物標志物檢測進一步證實所獲得的外泌體。應用無標記的定量方法系統(tǒng)比較唾液和血清外泌體的蛋白質(zhì)譜。通過LC-MS/MS分別從唾液和血清中鑒定出319和994個外泌體蛋白。為了探索其對癌癥蛋白質(zhì)組學的實用性，研究人員系統(tǒng)地比較了健康志愿者和肺癌患者的唾液和血清外泌體蛋白質(zhì)組。特別是在肺癌患者的兩種體液中，找到了11種潛在候選蛋白。該發(fā)現(xiàn)驗證了癌癥相關蛋白質(zhì)在唾液和血清外泌體中存在的假說。一旦這些候選蛋白被驗證，基于循環(huán)外泌體的體液測試可以容易地被建立起來并最終用于癌癥檢測。 曹成喜和肖華等系統(tǒng)地比較了健康志愿者和肺癌患者的唾液和血清外泌體蛋白質(zhì)組。特別是在肺癌患者的兩種體液中，找到了11種潛在檢測候選蛋白。一旦這些候選蛋白被驗證，基于循環(huán)外泌體的體液測試可以容易地被建立起來并最終用于癌癥檢測。 參考文獻：Sun Y, Liu S, Qiao Z, Shang Z, Xia Z, Niu X, Qian L, Zhang Y, Fan L, Cao CX, Xiao H. Systematic comparison of exosomal proteomes from human saliva and serum for the detection of lung cancer. Anal Chim Acta. 2017 Aug 22;982:84-95. 外泌體診斷公司Exosome Diagnostics發(fā)布最新液體活檢技術突破性進展@BIO2017 | C輪融資3000萬美元 CDx項目--- ExoDx使用臨床驗證的測定法通過患者分類篩選生物標志物。 ExoDx專利獲批的長鏈RNA測序——提供血漿外泌體液體活檢轉錄組分析技術。 外泌體Dx去除（和/或）富集（EDDE）平臺——該技術具有選擇識別特定組織類型來源的外泌體的能力，從而顯著提高任何目標的信噪比。 ExoDx Prostate（IntelliScore）——這是一種完全無創(chuàng)性的尿液CLIA LDT，旨在幫助醫(yī)生識別具有灰色區(qū)域PSA（2-10ng / ml）的男性，他們可以避免不必要的前列腺活組織檢查。 Shahky?——這是世界上第一個外泌體蛋白質(zhì)捕獲和分析儀器。 PSA-外泌體或可稱為前列腺癌早期檢測新方法 來自意大利迪桑尼塔高級研究所的研文章，驗證了酸性環(huán)境——惡性腫瘤的一個關鍵表型，可以影響外泌體的釋放并增加PCa細胞釋放的納米囊泡中的PSA表達水平。為此，研究人員采用了納米粒子追蹤分析（NTA）方法、基于免疫捕獲的ELISA和納米流式細胞術等方法進行實驗。結果表明，酸性微環(huán)境誘導PSA和外泌體標志物CD81的表達以及納米囊泡的釋放增加。為了驗證細胞外酸性的局部選擇壓力引起的變化是否與臨床表現(xiàn)相對應，研究人員使用相同的方法來評估PCa患者和對照組血漿中表達有PSA的外泌體的水平，對照組中包含有良性前列腺肥大（BPH）的受試者。結果顯示，只有PCa患者具有高水平表達CD81和PSA的納米囊泡。這項研究表明，腫瘤酸度造成選擇性壓力，導致表達PSA和外泌體標志物的細胞外囊泡的釋放。與BPH和健康對照相比，前列腺癌患者的血漿中顯示了類似的情況。這些結果表明，酸性微環(huán)境可能是定性和定量決定惡性腫瘤（包括前列腺癌）細胞外囊泡釋放的關鍵因素。這樣，癌細胞分泌的納米囊泡進入前列腺癌患者的外周血中，其中由外泌體表達的腫瘤生物標志物如PSA-外泌體可能代表了一種用于早期篩查診斷前列腺癌的新型非侵入性臨床工具。 Logozzi M等研究人員納米粒子追蹤分析（NTA）方法、基于免疫捕獲的ELISA和納米流式細胞術等方法來評估PCa患者和對照組血漿中表達有PSA的外泌體的水平，對照組中包含有良性前列腺肥大（BPH）的受試者。結果顯示，只有PCa患者具有高水平表達CD81和PSA的納米囊泡。這樣，癌細胞分泌的納米囊泡進入前列腺癌患者的外周血中，其中由外泌體表達的腫瘤生物標志物如PSA-外泌體可能代表了一種用于早期篩查診斷前列腺癌的新型非侵入性臨床工具。 參考文獻：Logozzi M, Angelini DF, Iessi E, Mizzoni D, Di Raimo R, Federici C, Lugini L, Borsellino G, Gentilucci A, Pierella F, Marzio V, Sciarra A, Battistini L, Fais S. Increased PSA expression on prostate cancer exosomes In In vitro condition and in cancer patients. Cancer Lett. 2017 Jul 7. 【綜述】外泌體在疾病診斷和治療上的應用 雖然外泌體早在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但外泌體的潛力只是在近些年逐漸被揭示。研究表明，外泌體的潛在應用可為三大類： 作為疾病特異性生物標志物檢測疾病 激活免疫反應以增強免疫力 作為藥物的載體，用于靶向腫瘤等 外泌體最有用的特性之一是它們能夠穿越屏障，如細胞質(zhì)膜、血/腦屏障。這使得它們非常適合遞送治療分子。 外泌體的潛在應用可以在該綜述中引用的研究項目中看到，這些研究項目已經(jīng)完成或正在進行中，例如： 改善前列腺癌的檢測 小細胞肺癌 干細胞外泌體保護心臟 肌肉和組織的再生 帕金森 糖尿病 發(fā)展趨勢包括: 外泌體診斷雖然已有產(chǎn)品出來，但仍未被管理機構批準，因此目前只能與現(xiàn)已批準的檢測方案并行使用。 外泌體在治療方面的應用是多方面的，從治療劑的包裝到調(diào)控免疫應答，應用范圍從腫瘤學到再生醫(yī)學。治療相關的規(guī)模化商業(yè)GMP生產(chǎn)正在進行中。 如晚期非小細胞肺癌的外泌體臨床試驗所觀察到的，外泌體可以發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，從而潛在地影響疾病進展。 間充質(zhì)干細胞（MSC）的治療作用可能是其外泌體發(fā)揮作用的，因為從MSC純化的外泌體可以發(fā)揮與MSC治療相似的作用。 它們具有將骨髓來源的細胞轉為促轉移表型的能力，已經(jīng)證明腫瘤外泌體具有可調(diào)控器官特異性轉移前龕建立的潛力。 該研究小組說，在研究外泌體轉化為新技術和治療方案之前，還有更多的事情要做。需要考慮其副作用，需要開發(fā)分離、表征和儲存外泌體的標準化方法。 我自己寫的 外泌體在免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用。外泌體能引發(fā)獲得性免疫或抑制炎癥發(fā)生。外泌體通過以下方式參與免疫抑制：1）調(diào)節(jié)T細胞活性（regulatory T cell）；2）調(diào)節(jié)自然殺傷細胞（nature killer cell）以及CD8+細胞活性；3）調(diào)節(jié)單核白細胞（monocyte）分化。 外泌體在腫瘤細胞免疫逃逸中發(fā)揮重要作用，將在下一節(jié)詳細敘述。 除了經(jīng)典的突觸神經(jīng)傳遞，神經(jīng)元之間，還可以通過分泌外泌體相互作用完成生物學功能。例如，。。。。研究發(fā)現(xiàn)，皮質(zhì)神經(jīng)元通過增加含有神經(jīng)遞質(zhì)受體的外泌體分泌來增強谷氨酸能的其活性。 外泌體還參與了細胞的表型分化。例如， 總結與展望 總之, 腫瘤細胞來源的外泌體通過在細胞間轉運一系列蛋白質(zhì)和miRNAs組分, 在促進腫瘤的侵襲和轉移中發(fā)揮了重要的作用。外泌體研究的深入豐富了我們對腫瘤細胞間的相互作用及其內(nèi)在機制的理解, 為研究腫瘤的診斷和治療新方法提供了理論基礎。利用外泌體為靶標建立系統(tǒng)的腫瘤早期診斷方法并開發(fā)新的抗腫瘤藥物與疫苗等, 將有效推動腫瘤醫(yī)學事業(yè)的發(fā)展。 外泌體的發(fā)現(xiàn)和證實將給人們對機體生理、 病理過程的認識帶來深刻影響， 幾乎所有生物醫(yī)學相關的生化和分子生物學檢測在外泌體分析的層面上都將開啟一個全新的維度。隨著人們對細胞囊泡系統(tǒng)及其功能的日漸重視，基礎研究領域，特別是關于細胞外分泌( exocytosis) 、 跨膜分泌( transcytosis) 等途徑機制相關研究的突破， 將會加深人類對外泌體的全面認識，其間各種高靈敏度、 高通量和高內(nèi)涵的分析手段也會發(fā)揮至關重要的作用。 腫瘤來源外泌體對腫瘤具有抑制或促進的雙重作用，這可能是外泌體、 細胞和環(huán)境因素之間復雜相互作用的結果，與腫瘤進展程度和機體免疫狀態(tài)密切相關。關于外泌體的研究至少在現(xiàn)階段呈現(xiàn)出一些鮮明的特點。首先絕大多數(shù)相關的研究視角是宏觀和全息( holistic) 的， 更多從機體或細胞功能和表型乃至療效著眼， 而并未糾結于對數(shù)量有限的特定基因的過度解析。因此， 長期以來深陷困惑和飽受挑戰(zhàn)的中西醫(yī)結合與中醫(yī)藥研究將在外泌體研究的背景下獲得寶貴的啟示和契機。外泌體不僅攜帶來源細胞的病理性或生理性標志蛋白質(zhì)或 ＲNA， 而且其中的活性分子直接具有藥效作用， 即外泌體本身可充當向特定病變部位轉運藥物、 小分子或生物治療 /基因治療制劑的載體; 同時還具有被修飾、 加工和改造的潛力?；谕饷隗w建立明確的腫瘤診斷方法，輔助腫瘤早期檢測和診斷，幫助判斷預后和治療效果，并開發(fā)新的抗腫瘤藥物和臨床腫瘤干預措施。腫瘤來源外泌體的相關研究在某種程度上尤其體現(xiàn)出轉化醫(yī)學研究的思路和模式， 將極大推動生物標志物研究進展，促進轉化醫(yī)學事業(yè)的進步。