紫外分光光度法和熒光分析法.ppt
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一、紫外—可見光分光光度法,光譜分析法,二、熒光分析法,,基本原理,儀器主要部件,,紫外-可見光分光光度法,主要應(yīng)用,基本原理,概述:紫外-可見分光光度法是通過被測(cè)物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)的特定波長(zhǎng)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。主要用于藥品的鑒別、檢查和含量測(cè)定。范圍:,可見光區(qū)(400~760nm),紫外光區(qū)(200~400nm),Beer-Lambort定律,*A為吸收度;*T為透光率;*E為吸收系數(shù)(以表示,溶液濃度為1%(g/ml),厚度為1cm時(shí)的吸光度值)*c為溶液濃度;*l為樣品總厚度。,適用條件:,入射光為單色光溶液是稀溶液固體、液體和氣體樣品在同一波長(zhǎng)下,各組分吸光度具有加和性,儀器主要部件,光源:常采用氘燈和鎢鹵燈鎢燈最適宜的使用波長(zhǎng)范圍為320~1000nm。氘燈能發(fā)出光的波長(zhǎng)范圍一般為190~400nm單色器:棱鏡或光柵吸收池:玻璃或石英吸收池檢測(cè)器:光電池、光電管、光電倍增管及二極管陣列檢測(cè)器,儀器分類,單光束紫外可見分光光度計(jì)準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)雙光束紫外可見分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)紫外可見分光光度計(jì),主要應(yīng)用,利用藥物與雜質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收性質(zhì)的差異,若藥物在雜質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)處沒有吸收,則可在此波長(zhǎng)處測(cè)樣品溶液的吸收度,通過控制樣品溶液吸收度來控制雜質(zhì)的量。例:地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查二羥基蒽醌的三氯甲烷溶液在432nm處有最大吸收,而地蒽酚在該處幾乎無吸收。,,1、藥物的雜質(zhì)檢查,,2、藥物的含量測(cè)定,如巴比妥類藥物的含量測(cè)定(巴比妥類藥物在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu))、芳酸及其脂類藥物含量測(cè)定、維生素A含量測(cè)定(在325~328nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)有最大吸收)等。,三點(diǎn)校正法本方法是在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度,根據(jù)校正公式計(jì)算吸光度校正值后,再計(jì)算含量。其原理主要基于以下兩點(diǎn):①雜質(zhì)的無關(guān)吸收再310~340nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)幾乎呈一條直線,且隨波長(zhǎng)的增大吸光度下降。②物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性的原理,即在某一樣品的吸收曲線上,各波長(zhǎng)的吸光度是維生素A與雜質(zhì)吸光度的代數(shù)和,因而吸收曲線也是二者吸收的疊加。,,3、藥物的鑒別,對(duì)比吸收光譜特征數(shù)據(jù)對(duì)比吸收度(或吸收系數(shù))的比值對(duì)比吸收光譜的一致性,例苯磺舒:用含鹽酸的乙醇[取鹽酸溶液(9-1000)2ml,加乙醇制成100ml]制成沒1ml中含20ug的溶液,在225nm與249nm的波長(zhǎng)處有最大吸收,在249nm波長(zhǎng)處的吸收度為0.67。甾體激素類藥物:丙酸倍氯米松的乙醇溶液(20ug/ml),在239nm的波長(zhǎng)處應(yīng)有最大吸收,吸光度為0.57~0.60;在239nm與263nm波長(zhǎng)處的吸光度比值應(yīng)為2.25~2.45,,1.判別物質(zhì)的異構(gòu)體,如互變異構(gòu)體,順反異構(gòu)體,開鏈和成環(huán)異構(gòu)體,旋光異構(gòu)體,空間異構(gòu)體等。反式異構(gòu)體空間位阻小,共軛程度較完全。最大吸收峰波長(zhǎng),最大摩爾吸收系數(shù),大于順式。2.推測(cè)物質(zhì)的共軛體系和部分骨架一般需與色譜,紅外,質(zhì)譜,波譜等多種儀器聯(lián)合作物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析。,,4.結(jié)構(gòu)分析,紫外分光光度測(cè)定方法,普通測(cè)定分光光度法1.單組分的測(cè)定通常采用A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。2.多組分的同時(shí)測(cè)定⑴若各組分的吸收曲線互不重疊,則可在各自最大吸收波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本質(zhì)上與單組分測(cè)定沒有區(qū)別。⑵若各組分的吸收曲線互有重疊,則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。Aλ1=εaλ1bca+εbλ1bcbAλ2=εaλ2bca+εbλ2bcb,差示分光光度法,普通分光光度法一般只適于測(cè)定微量組分,當(dāng)待測(cè)組分含量較高時(shí),將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強(qiáng)度,并采用濃度稍低于待測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。設(shè):待測(cè)溶液濃度為cx,標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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