工業(yè)用溶菌酶行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿
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69 華 人 民 共 和 國 輕工 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn) 業(yè)用溶菌酶 擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí) (征求意見稿) 布 施 中華人民共和國工業(yè)和信息化部 發(fā)布 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)按照 本標(biāo) 準(zhǔn)由 全國食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心 提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn) 主要 起草單位: 本標(biāo)準(zhǔn) 主要 起草人: 工業(yè)用溶菌酶 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了 工業(yè)用溶菌酶 的術(shù)語和定義、 產(chǎn)品 分類、要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸及貯存。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于從雞蛋清中提取 、 精制等工藝制得的 工業(yè)用 溶菌酶。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。 601 化學(xué)試劑 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備 602 化學(xué)試劑 雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 603 化學(xué)試劑 試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中灰分的測(cè)定 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 產(chǎn)品 分類 按 產(chǎn)品狀態(tài) 分為 固體和液體 。 4 要求 官要求 應(yīng)符合表 1的 規(guī)定。 表 1 感官要求 項(xiàng) 目 要 求 固體 液體 狀 態(tài) 粉末 液態(tài) 色 澤 白色至淡黃色 淺黃色至深褐色 化要求 應(yīng)符合表 2的規(guī)定。 表 2 理化要求 項(xiàng) 目 指 標(biāo) 固體 液體 酶活力 /[u/mg( ≤ 符合標(biāo)示值 水分 /% ≤ 6 — 灰分 /% ≤ .3 菌 作用 合格 品安全要求 應(yīng)符合 國家相關(guān) 規(guī)定。 5 試驗(yàn)方法 本方法中所用的水,在未注明其他要求時(shí),應(yīng)符合 6682級(jí) 水的規(guī)格,所用試劑,在未注明其他規(guī)格時(shí),均指分析純 ( 分析中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑 及制品,在沒有注明其它要求時(shí),均按 601、 602、 603的規(guī)定制備。 官要求 取適量 試樣 ,在自然光線下, 觀察 試樣 的 色澤 和 狀態(tài) , 并記錄 。 活力 法原理 溶菌酶可水解細(xì)菌的細(xì)胞壁,造成藤黃微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。 一個(gè)溶菌酶活力單位定義為 25℃ , 用藤黃微球菌懸濁液在 450 劑和溶液 黃微球菌 698 或 同等分析效果 。 菌酶標(biāo)準(zhǔn)品 蛋清溶菌酶 。 .1 磷酸鹽緩沖液 ( 稱取 g 磷酸二氫鈉( g 磷酸氫二鈉( 2及 二胺四 乙 酸二鈉 ( 于煮沸滅菌的 水 中并 稀釋定容至 1000 整緩沖溶液 注:用小份緩沖溶液檢查 避免緩沖溶液被污染。如果需要,通過加入更多的磷酸二氫鈉溶液或磷酸氫二鈉溶液調(diào)整 緩沖液可 貯 存于冰箱一個(gè)月以上 。 物溶液 稱?。?10 15 ± 球菌,溶解于 50 ,傾斜混勻,不要晃動(dòng)。使用前,底物于 37℃ 培養(yǎng) 30 底物溶液室溫下 可穩(wěn)定 2 h。 以磷酸鹽緩沖液調(diào)分光光度計(jì)零點(diǎn),然后測(cè)定底物溶液的吸光度, 450 器和設(shè)備 光光度計(jì):精度 ± 。 注:所用的器皿應(yīng)保持無菌,保證工作環(huán)境的清潔。 析步驟 樣溶液 的制備 準(zhǔn)確稱取 100 .1 樣,置于 50 量瓶中,用約 25 酸 鹽 緩沖液( 拌溶解并稀釋定容,充分混勻。再轉(zhuǎn)移 3 述 試樣制 備 溶液至 100 量瓶中,用磷酸 鹽 緩沖液( 拌溶解并稀釋定容 。 準(zhǔn)溶液的制備 精確稱取 50 菌酶標(biāo)準(zhǔn)品于 50 量瓶中, 用約 25 酸 鹽 緩沖液( 拌溶解并稀釋定容,充分混勻 ( 如果需要,冷凍該溶液以備后續(xù)測(cè)定 ) 。轉(zhuǎn)移 3 述 標(biāo)準(zhǔn)制備 溶液 至 100 磷酸 鹽 緩沖液( 拌溶 解并稀釋定容 。 定 取三份標(biāo)準(zhǔn)溶液和三份試樣溶液進(jìn)行測(cè)定。 25℃室溫下,將 1 色皿放入分光光度計(jì),調(diào)整吸光度零點(diǎn)。吸 2.9 物溶液于比色皿,最初 450 吸光度應(yīng)為 3 內(nèi)初始吸光度值變化應(yīng)小于等于 ,方可開始測(cè)定。吸 0.1 準(zhǔn)溶液加入底物溶液,充分混合。記錄 3 光度值的變化,每 15 s 記錄一次吸光值。每分鐘吸光度值變化應(yīng)在 間,若不在要求范圍需調(diào)整試樣溶液的濃度。重復(fù)操作測(cè)定試樣溶液。 反應(yīng) 1 穩(wěn)定,計(jì)算時(shí)忽略最初 1 讀數(shù)。 果計(jì)算 酶活力 按式( 1)計(jì)算,數(shù)值以 u/mg(示。 11 ???? … ……………………………… ( 1) 式中: — 試樣的酶活力 , 單位為 u/mg( 試樣 在 450 反應(yīng) 1 的吸光度; 試樣 在 450 反應(yīng) 3 的吸光度; m—— 用于分析的 試樣 制備 溶液 中的溶菌酶質(zhì)量, 單位為毫克( ; 2—— 獲得 1 3 光度讀數(shù)所用的時(shí)間 ,單位為分鐘( ; 由單位溶菌酶每分鐘引起的吸光度降低的值 。 密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值應(yīng)不超過算術(shù)平均值的 10 %。 分 按 定。 分 按 定。 5.5 儀器 和設(shè)備 酸度計(jì):精度 備有玻璃電極和甘汞電極(或復(fù)合電極)。 析步驟 定 按儀器使用說明書調(diào)試和校正酸度計(jì)。 用新煮沸冷卻的 水 配制 15 g/L 的溶菌酶待測(cè)液(液體產(chǎn)品直接測(cè)定) 。 用水沖洗電極探頭,用濾紙輕輕吸干,將電極插入待測(cè)液中,調(diào)節(jié)溫度調(diào)節(jié)器,使儀器指示溫度與 待測(cè)液 溫度相同,穩(wěn)定后讀數(shù)。 所得結(jié)果表示至一位小數(shù)。 密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值應(yīng)不超過算術(shù)平均值的 1 %。 菌 作用 劑 和溶液 試菌 : 金黃色葡萄球菌( 538)、大腸埃希氏菌( 1229) ; 蛋白胨(生化試劑) ; 脂粉(生化試劑) ; 母提取物(生化試劑); 化鈉 ; 氫氧化鈉溶液 ; 菌生理鹽水 。 器 和設(shè)備 子天平 ; 凈工作臺(tái); 壓滅菌鍋; 溫培養(yǎng)箱; 床; 持比濁計(jì); 量移液器 ; 標(biāo)卡尺 養(yǎng)皿( 90 菌槍頭盒( 配有 10 μL, 200 μL, 1000 μ 菌棉簽; 菌打孔器 種環(huán) ; 角涂布棒 ; 菌帶棉塞試管 ( 18 180 口膜 。 析步驟 培養(yǎng)基 的配制 體培養(yǎng)基: 稱取 10 g 胰蛋白胨, 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化鈉,置于燒杯中, 加入約 600 玻璃棒 攪拌使 溶解 。 用 1 氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié) 加水定容至 1000 加入瓊脂 15 g,加熱融化 。 分裝、加塞、包扎 , 100 高壓蒸 汽滅 菌 20 在超凈臺(tái) 中 將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿 ,每板約 20 度約 2 倒入后 水平放置,打開 塞子 , 紫外 照射( 10~ 15) 凝固后,用封口 膜 封邊,倒置放入 30℃ 恒溫培養(yǎng)箱中, 2 d 后觀察若 無 菌落生長 可 繼續(xù)進(jìn)行 試驗(yàn) ,否則需重新倒平板。 體培養(yǎng)基: 稱取 10 g 胰蛋白胨, 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化鈉,置于燒杯中, 加入約 600 玻璃棒攪拌使 溶解 。 用 1 氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié) 水定容至 1000 分裝、加塞、包扎 , 100 高壓蒸 汽滅 菌 20 冷卻 后置于 4℃ 下 保存, 一周 內(nèi)使用。 試菌株活化 和 涂布 取 供試菌 置于 37℃水浴 解凍,不斷輕微搖動(dòng),直至完全溶解(約 2 在無菌 環(huán)境 下,接種環(huán)在酒精 燈燒過冷卻后,直接蘸 取 已溶解 的 菌液進(jìn)行劃線,接種于 體培養(yǎng)基, 平板倒置 放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 h。從 平板 中挑單菌于加有 5 B 液體培養(yǎng)基帶棉塞的試管( 18 180 ,置于 37℃、 150 床中培養(yǎng)至 1.0 2.0 間 ,菌液保存于 4℃冰箱中備用。吸取 100 μ液涂注入培養(yǎng)皿( 90 放置 約 5 用 三角涂布棒 涂布均勻, 5 再用封口膜封邊,倒置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 h,保存于 4℃冰箱中備用。 樣溶液 的制備 取適量 試樣 溶解 于 100 菌生理鹽水 中, 移取 上述溶液 10 容至 100 到試樣溶液(要求 每毫升 試樣溶液 中 至少含有 20000 U 濃度的溶菌酶 ,否則需重新配制 ) 。 取 試樣溶液 50 μ 觀察抑菌效果。 注 1: 用無菌生理鹽水溶解 時(shí) , 須 將 產(chǎn)生的 泡沫全部洗至無菌生理鹽水中。 注 2:試樣溶液 嚴(yán)禁高溫消毒。 定 在超凈臺(tái)里 , 用接種環(huán)(酒精燈 燒過 后冷卻 至室溫 )從 4℃冰箱保存的供試菌株涂布 平板 中輕刮一環(huán)菌體, 于 加有 5 菌生理鹽水的試管中, 振 蕩均勻,制成菌懸液。 用 無菌生理鹽水調(diào)整濁度 , 氏標(biāo)準(zhǔn)比濁管相同 (或者 手持比濁計(jì) 測(cè) ,相當(dāng)于 108 每毫升樣品中含有的細(xì)菌菌落總數(shù) ) 。 制備的菌液必須在 15 使用 。 用無菌棉 簽 蘸取 供 試菌懸液, 在管壁上擠壓幾次 , 去掉過多的菌液 后, 在 平板 培養(yǎng)基表面均勻涂抹3 次。每涂抹 1 次,平板應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng) 60°,最后將棉 簽 繞平板邊緣涂抹 2 圈,保證涂布均勻。 蓋好 平板 , 室溫 下靜置 30 每種 供 試菌 設(shè)兩個(gè)重復(fù)平板 。 在超凈臺(tái) 中 用 直徑為 5 菌打孔器 (不銹鋼或玻璃管或塑料管)打孔 , 用針頭 挑取孔內(nèi)凝膠 ,并以 酒精燈 火焰封底, 使培養(yǎng)基 與 培養(yǎng)皿充分 融合。 各 圓孔 中心之間相距 25 上,與平板的周緣 相距 15 上。 每個(gè) 平板 需要一個(gè)重復(fù)。 給每個(gè)孔標(biāo)號(hào),每孔進(jìn)樣 50 μL,同時(shí)留一孔進(jìn) 50 μL 無菌生理鹽水做對(duì)照組。蓋好 平板 ,用 封口膜 封邊, 正置 放入 4℃冰箱中 2 h,再 倒置 放入 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 18 h 后取出,觀察結(jié)果并測(cè)量抑菌圈大小。 測(cè)量抑菌環(huán)時(shí),應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進(jìn)行 , 其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界 , 抑菌環(huán)的 外沿 以肉眼 看不見 細(xì)菌明顯生長為限。溶菌 環(huán) 不圓時(shí), 測(cè)定 最大及最小直徑求其平均直徑。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑 ( 包 括孔洞 ) 并記錄。試驗(yàn)結(jié)果取重復(fù) 2 次的平均值。 對(duì)照組應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生,否則需要重新試驗(yàn)。 果判定 抑菌環(huán)直徑 > 6 為有抑菌作用; 抑菌環(huán)直徑 ≤ 6 為無抑菌作用。 2 次重復(fù)試驗(yàn)均有抑菌作用,判為合格。 6 檢驗(yàn)規(guī)則 批 同 一班次 、同 一 工藝 、 同一包裝線當(dāng)天包裝出廠(或入庫的),質(zhì)量均一的產(chǎn)品為一批。 樣 與留樣 樣 樣應(yīng)均勻分布在整個(gè)灌裝過程中,或均勻分布于灌裝后的成品中。 用適宜的方法保證取樣具有代表性,保證取樣部位和取樣瓶的清潔。對(duì)用于微生物試驗(yàn)的取樣,應(yīng)使用無菌操作。 據(jù)批量大小,按表 3 規(guī)定隨機(jī)抽取樣本,取樣總量不少于 500 g(或 500 。 表 3 糊精抽樣表 批量 /桶或箱 樣本 量 /桶或袋 < 50 2 51~ 500 3 > 500 4 注:批量是指批中所包含的單位商品數(shù),單位為桶或箱。樣本量是指樣本中所包含的樣本單位數(shù),單位為桶或袋。 樣 將樣品充分混合后置于 2 個(gè)潔凈、干燥樣品瓶中,封好。注明產(chǎn)品名稱、批號(hào)、取樣時(shí)間、取樣人姓名。一瓶化驗(yàn),另一瓶留樣備查。 廠檢驗(yàn) 出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為 感官、 酶活力 、 水分 (固體) 、 灰分 、 抑菌作用 。 式檢驗(yàn) 檢驗(yàn)項(xiàng)目為本標(biāo)準(zhǔn)要 求中規(guī)定的全部項(xiàng)目。一般情況下,型式檢驗(yàn)半年進(jìn)行一次。有下列情況之一時(shí),亦應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn): a)原輔材料有較大變化時(shí); b)更改關(guān)鍵工藝或設(shè)備時(shí); c)新試制的產(chǎn)品或正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn) 3 個(gè)月后,重新恢復(fù)生產(chǎn)時(shí); d)出廠檢驗(yàn)與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí); e)國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)按有關(guān)規(guī)定需要抽檢時(shí)。 定規(guī)則 指標(biāo)有一項(xiàng)不合格,可加倍抽樣進(jìn)行復(fù)驗(yàn),以復(fù)檢結(jié)果為準(zhǔn);若復(fù)檢結(jié)果有一項(xiàng)不合格,判該批次產(chǎn)品為不合格。 7 標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存 志 食品 用 溶菌酶 標(biāo)簽 應(yīng)符合 718的規(guī) 定。包裝儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)識(shí)應(yīng)符合 191的規(guī)定。 裝 包裝容器應(yīng)整潔、衛(wèi)生、無破損,并應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)定。 輸 運(yùn)輸工具應(yīng)清潔衛(wèi)生。不得與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品混裝、混運(yùn),應(yīng)避免受潮、受壓、暴曬。裝卸時(shí),應(yīng)輕拿輕放,不得直接鉤扎包裝袋。 存 本品應(yīng)儲(chǔ)存在 陰涼、 干燥、清潔的倉庫內(nèi) ( 0℃以下) ,嚴(yán)防日曬雨淋,嚴(yán)禁火種。不得與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品放在一起。 A _________________________________- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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