動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚A的測定

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北省 食品安全 地方標(biāo)準(zhǔn) 2/ 物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 征求意見稿） 2013 – 布 2013 - 施 湖北省 衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)采用穩(wěn)定性同位素稀釋的超高效液相色譜 質(zhì)譜法 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院負(fù)責(zé)解釋。 本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所 。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：龔艷、胡定金、彭立軍、李書謙、樊銘勇。 本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布。 請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。 動物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物性食品中六溴環(huán)十二烷異構(gòu)體（ α、 β和 γ和四溴雙酚 串聯(lián)質(zhì)譜法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于 魚 、肉、蛋、奶等 動物性 食品中六溴環(huán)十二烷異構(gòu)體和四溴雙酚 本標(biāo)準(zhǔn)定量限為： α、 β和 γ別為 ng/g， ng/g， ng/g(以脂肪計 )，四溴雙酚 A ng/g (以脂肪計 )。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫 3 原理 本方法應(yīng)用穩(wěn)定性同位素稀釋技術(shù)，在試樣中加 入 13內(nèi)標(biāo)溶液，以正己烷和丙酮（ 1:1， v/v）為提取溶劑索氏提取 24 h，經(jīng) 酸化硅膠柱 凈化后，以超高效液相色譜 質(zhì)譜進(jìn)行測定， 內(nèi)標(biāo)法定量。 4 試劑與材料 醇（ 色譜純。 酮（ 色譜純。 己烷（ 色譜純。 腈（ 色譜純。 氯甲烷（ 色譜純。 水硫酸鈉（ 分析純，使用前經(jīng) 650 ℃ 干燥 4 h。 酸（ ：含量 98%，優(yōu)級純。 膠：硅膠（ 60，進(jìn)口品牌 *。將硅膠裝入玻璃色譜柱中依次用甲醇和二氯甲烷淋洗一次，每次使用的溶劑體積約為硅膠體積的兩倍。完成淋洗后將硅膠放置在鋁箔上于通風(fēng)柜中自然風(fēng)干，然后 130 ℃ 下活化 4 h，完成后裝入磨口試劑瓶中，干燥器中保存。 4%酸化硅膠：稱取活化好的硅膠逐步加入濃硫酸 (硅膠與硫酸質(zhì)量比為 44/56)，振搖過夜至無塊狀物。完成后裝入磨口試劑瓶中，干燥器中保存。 純水：電導(dǎo)率 ≤18.2 mΩ/ 、 β、 γ度大于 99%，均為 50 μg/于甲醇中。 、 β、 γ度大于 98%，均為 50 μg/于甲醇中。 溴雙酚 A 標(biāo)準(zhǔn)溶液：純度大于 99%， 50 μg/于甲醇中。 3 標(biāo)準(zhǔn)溶液：純度大于 99%， 50 μg/于甲醇中。 準(zhǔn)應(yīng)用溶液 溴環(huán)十二烷與四溴雙酚 A 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 A（各化合物濃度 1 μg/分別準(zhǔn)確量取 αβ二烷， γ 標(biāo)準(zhǔn)溶液各 轉(zhuǎn)移至 10 色容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 冰箱保存。 溴環(huán)十二烷與四溴雙酚 A 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 B（ 100 ng/準(zhǔn)確量取六溴環(huán)十二烷與四溴雙酚 A 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 A 轉(zhuǎn)移至 10 色容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 冰箱保存。 33 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 A（各化合物濃度 1 μg/分別準(zhǔn)確量取 1313133標(biāo)準(zhǔn)溶液各 轉(zhuǎn)移至 10 色容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 冰箱保存。 33 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 B（ 100 ng/準(zhǔn)確量取 133 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 A 轉(zhuǎn)移至 10 色容量瓶中，用甲醇定容至刻度， 冰箱保存。 準(zhǔn)系列溶液： 吸取 溴環(huán)十二烷與四溴雙酚 A 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 B（ 100 ng/ 溴環(huán)十二烷與四溴雙酚 A 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 A（ 1 μg/，分別置于 10 量瓶中， 再各加入 0.5 標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 A (1 μg/ 用甲醇稀釋至刻度。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 中 六溴環(huán)十二烷異構(gòu)體和四溴雙酚 A 的濃度分別為 500.0 ng/標(biāo)濃度為 50.0 ng/ 5 儀器 與 設(shè)備 高效液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀（ S）： 由 液相色譜儀 （配有梯度泵、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器）與質(zhì)譜儀組成 。 機(jī)濾膜： m。 織勻漿機(jī)。 壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：也可使用 機(jī)樣品濃縮儀等性能相當(dāng)?shù)臐饪s設(shè)備。 氏提取裝置： 250 500 1000 可采用其它性能相當(dāng)?shù)奶崛⊙b置。 吹濃縮儀。 蕩器。 純水機(jī)。 析天平，精確到 g。 漩混合器。 空冷凍干燥機(jī)。 心機(jī)，最高轉(zhuǎn)速大于 3000 r/ 速粉碎機(jī)。 床。 璃層析柱：長 350 徑 20 部具有聚四氟乙烯活塞的玻璃柱。 干凈的 玻璃層析柱 底部塞一小撮棉花，從下往上依次倒入 2 水硫酸鈉、 15 g 44%酸化硅膠、 2 水硫酸鈉（參見附附錄圖 B： 玻璃層析柱 示意圖 ） , 用洗耳球輕震管壁以使填料表面水平 ，正己烷倒入管內(nèi)排除氣泡后，用 200 己烷活化柱子備用。 6 分析步驟 樣制備 對于肉類、魚類和蛋類等固態(tài)或半固態(tài)樣品，選取可食部分，經(jīng)勻漿器勻漿后，取樣品約 50 20 ℃以下冰箱中冷凍 24 h，轉(zhuǎn)移至 冷凍干燥機(jī)中干燥 24 h，將干燥后的固體樣品研成粉末 待檢。 牛奶等液態(tài)樣品， 取混勻后的樣品 50 移至培養(yǎng)皿中，于 以下冰箱中冷凍 24 h，轉(zhuǎn)移至真空 冷凍干燥機(jī)中干燥 24 h，將干燥后得到的固體研碎 待檢。 品提取 固態(tài)或半固態(tài)樣品如魚肉、雞蛋等：取 2~5 確至 g）置于玻璃纖維套 筒中，加入內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 適量玻璃棉覆蓋，以 300 丙酮混合溶液 (1∶ 1， v/v)為提取劑，在 50~70 ℃ 的溫度下 索氏提取 20 小時約回流 4次。索氏提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后放置過夜備用。 液體樣品如牛奶等：將干燥后研碎的固體樣品全部轉(zhuǎn)移至玻璃纖維套筒中，加入內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 B 200 μ量無水硫酸鈉，以適量玻璃棉覆蓋，以 300 丙酮混合溶液 (1∶ 1， v/v)為提取劑，在 50~70 ℃ 的溫度下索氏提取 20 小時約回流 4次。索氏提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后放置過夜備用。 品凈化 將索氏提取后的溶液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中， 旋蒸提取液至近干并靜置過夜 ；以圓底燒瓶為恒重容器 測定脂肪含量 后，用 2~4 滴入 璃層析柱 上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 3~4次； 100 100 二氯甲烷混合溶液 (1:1， v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2~4 復(fù)清洗燒瓶 3~4次，轉(zhuǎn)移至 10 氣吹干后加入 200 μ渦振蕩 1 定 相色譜參考條件 譜柱 *： 18柱（ 2.1 mm ×50 m）。 溫： 50 ℃ 。 品池溫度： 10 ℃ 。 樣體積： 5 μL。 速： 0.3 mL/ 動相： 乙腈混合液（ 1： 1， v/v）， 度洗脫（ A:B=80:20）。 譜參考條件： 子源：電噴霧電離 -）。 測方式： 吹氣溫度（ 325 ℃ ； 吹氣流量（ 6 L/ *給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不表示對品牌產(chǎn)品的認(rèn)可，如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使 用這些等效的產(chǎn)品。 力（ 42 氣溫度（ 380 ℃ ； 氣流量（ 11 L/ 細(xì)管電壓（ 4000 V； 嘴電壓（ 1500 V； 測離子、碰撞能量和錐孔電壓（見表 1）： 表 1 六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的多反應(yīng)離子監(jiān)測分析參數(shù) 監(jiān)測離子對 （ （ m/z） 駐留時間 （ 錐孔電壓（ (V) 碰撞能量 （ V) 六溴環(huán)十二烷 *0 80 10 0 80 10 四溴雙酚 A *0 170 30 0 170 38 13 *0 80 6 0 80 14 13 *0 170 30 *為定量離子對 定 準(zhǔn)曲線繪制 吸取 列標(biāo)準(zhǔn)溶液各 5 進(jìn)樣，以 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)化合物與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按下式計算平均相對響應(yīng)因子。 5 ? 式中： 均相對 響應(yīng)因子； 準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物絕對質(zhì)量 準(zhǔn)溶液中待測物絕對質(zhì)量 測物峰面積； 標(biāo)物峰面積； 計算結(jié)果表示到三位有效數(shù)位。 樣測定 吸取試樣溶液 5 進(jìn)樣，記錄總離子流圖及待測物和內(nèi)標(biāo)的峰面積，以保留時間及碎片離子的豐度定性，要求所檢測的待測物色譜峰信噪比 (S/N)大于 3；待測物相應(yīng)監(jiān)測離子的豐度偏差不超過標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)離子豐度的 20%。 7 結(jié)果計算 按下式由內(nèi)標(biāo)法計算試樣中各待測物的濃度： ????i i 樣中待測物的 含量 ng/g（以脂肪計） ； 樣中內(nèi)標(biāo)物的絕對質(zhì)量 均相對響應(yīng)因子； 測物的峰面積； 標(biāo)峰面積； 取 樣品脂肪 重量 g； 計算結(jié)果表示到三位有效數(shù)位。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的 20%。 附 錄 A （ 資料性 附錄） 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖 1- 13 2- 13 3- 13 4- α 5- β 6- γ 7- 13； 8- 四溴雙酚 A。 圖 A 為六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 標(biāo)準(zhǔn)溶液 譜圖 附 錄 B （ 規(guī)范性 附錄） 玻璃 層析柱 示意圖 圖 B 為 玻璃 層析柱 示意圖 A