華東師范大學(xué)生物系生化技術(shù)總復(fù)習(xí)(共8頁)

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1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-----傾情為你奉上 1、 名詞解釋： 1． 【生化技術(shù)】在生物化學(xué)及其相關(guān)學(xué)科應(yīng)用的各種技術(shù)統(tǒng)稱為生化技術(shù)。主要指生物體內(nèi)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物，特別是生物大分子如蛋質(zhì)、核酸的分離、檢測、制備與改造技術(shù)。 2． 【抽提】是指用適當(dāng)?shù)娜芤海ㄈ缇彌_液、稀酸、稀堿或有機(jī)溶劑如丙酮、乙醇）進(jìn)行反復(fù)萃取，逐步將原料中有效成分最大限度分離出來的過程。 3． 【有機(jī)溶劑沉淀法】利用與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇、丙酮等)能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法，稱為有機(jī)溶劑沉淀。其原因有二，一是具有脫水作用，二是有機(jī)溶劑的介電常數(shù)比水導(dǎo)致溶劑的極性變小。 4． 【吸附柱層析】是以固

2、體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動相構(gòu)成柱狀的一種層析方法。常用吸附劑有極性和非極性兩種。前者有羥基磷灰石、硅膠、氧化鋁和人造沸石等，后者有活性炭等。這種層析方法已成為科研、醫(yī)學(xué)、化工及發(fā)酵等部門常規(guī)使用的一種分離手段。 5． 【凝膠過濾層析】使用有一定大小孔隙的凝膠作層析介質(zhì)(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)，利用凝膠顆粒對分子量和形狀不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的層析技術(shù)。由于各種分子的大小、形狀不同，擴(kuò)散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同，因而通過層析柱的快慢不同而分離。 6． 【高效疏水層析】利用適度疏水性的填料，以含鹽的水溶液作為流動相，借助于疏水作用分離活性蛋白質(zhì)的液相層析法稱

3、為高效疏水層析。 7． 【毛細(xì)管電泳】以毛細(xì)管為分離通道、高壓電場為驅(qū)動力的電泳分離分析法。包括毛細(xì)管自由流動電泳、毛細(xì)管區(qū)帶電泳等。 在高電場強(qiáng)度作用下，毛細(xì)管中的待測物質(zhì)可按其分子質(zhì)量、電荷、淌度等因子的差異得到有效的分離。 8． 【等電點(diǎn)聚焦電泳】即電聚焦電泳法，是在一定抗對流截肢（如凝膠）中加入載體兩性電解質(zhì)，當(dāng)直流電通過時，形成一個由陽極到陰極pH逐步上升的梯度。兩性化合物在此電泳過程中，就被濃集在與其等電點(diǎn)相等的pH區(qū)域，從而使不同化合物能按其各自等電點(diǎn)得到分離。 9． 【離子交換層析】是以離子交換劑為固定相，液體為流動相的系統(tǒng)中進(jìn)行的。樣品中待分離的溶質(zhì)離子，與固定相上所結(jié)

4、合的離子交換，不同的溶質(zhì)離子與離子交換劑上離子化的基團(tuán)的親和力和結(jié)合條件不同，洗脫液流過時，樣品中的離子按結(jié)合力的弱強(qiáng)先后洗脫。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域此法常用于分離蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子。 10． 【高效反相層析】利用非極性烷基固定相作為填料，以含有機(jī)改性劑（如異丙醇）的水溶液作為流動相，借助于疏水效應(yīng)分離蛋白質(zhì)或核酸的液相層析法。 11． 【親和層析】以親和吸附劑作為固定相，以特異性溶液為流動相，對配體（L）具有親和力之有效成分（S）進(jìn)行分離的過程。即利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結(jié)合作用而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)?？梢赃x用生物化學(xué)、免疫化學(xué)或其他結(jié)構(gòu)上吻合等親和作用而設(shè)計

5、的各種層析分離方法。 12． 【生物傳感器】利用固定化的生物敏感材料(如酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜、微生物、細(xì)胞等)作為識別元件，與適當(dāng)?shù)睦砘瘬Q能器（如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等等）及信號放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)，將生化反應(yīng)轉(zhuǎn)變成可定量的物理、化學(xué)信號，從而能夠進(jìn)行生命物質(zhì)和化學(xué)物質(zhì)檢測和監(jiān)控的裝置。 13． 【PCR】即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時等特點(diǎn)。 14． 【芯片實驗室】也稱微全分析系統(tǒng)或微流控芯片。它是采用

6、微電子工業(yè)和半導(dǎo)體制造業(yè)中的一些精細(xì)工藝，在硅片、玻片和塑料等表面經(jīng)過必要的物化處理后，加工出微細(xì)（微米級）結(jié)構(gòu)，制作成一塊幾平方厘米的、新興的生物芯片，可進(jìn)行化學(xué)或生物化學(xué)的實驗程序。 15． 【層析】是以基質(zhì)為固定相（柱狀或薄層狀），以液體或氣體為流動相，使有效成分和雜志在這兩個相中連續(xù)不斷、反復(fù)多次地進(jìn)行分配或交換、吸附作用，最終達(dá)到分離混合物的目的。常用幾種溶液有平衡液、洗滌液和洗脫液。 16． 【固定化酶】是用適當(dāng)?shù)奈锢怼⒒瘜W(xué)方法，把粗制的或純化的酶固定于某一空間內(nèi)，使其成為既保持了本身的特性，又能在連續(xù)反應(yīng)之后可以回收和重復(fù)使用的一種制品。 17． 【細(xì)胞凋亡】即程序性細(xì)胞死

7、亡，是細(xì)胞通過內(nèi)在的程序來決定其死亡的，常常是生理性的。 18． 【電滲現(xiàn)象】在電場的影響下，帶電荷的液體對攜帶相反電荷的固定介質(zhì)進(jìn)行相對運(yùn)動的現(xiàn)象?？梢愿淖儙щ婋x子在電泳中的移動速度甚至方向。免疫對流電泳中也利用了電滲現(xiàn)象。 2、 選擇題中的計算公式 1. （P99）【分配系數(shù)Kav】 Kav=Ve-Vo/Vt-Vo Ve：分離物體本身的洗脫體積 Vo：外水體積 Vt：凝膠床總體積 備注：在固定相和層析柱體積已確定時，Vt和Vo都為恒定值，Ve隨分離物分子質(zhì)量的變化而變化（反關(guān)系）。 2. （P328）【總濃度T%；交聯(lián)度C%】 T%=a+b/v；C%=b/a+b

8、a：單體——丙烯酰胺重量（g） b：雙體（交聯(lián)劑）——甲撐雙丙烯酰胺重量（g） v：溶液中的體積（ml） 3、 各章重點(diǎn) 第一章 生命大分子物質(zhì)的制備 1. 影響抽提有效成分的主要因子（選擇判斷） pH （堿低酸高）、溶劑極性和離子強(qiáng)度、水解酶、溫度（低溫）、攪拌、氧化、金屬離子 抽提液與抽提物的比例（5:1） 2. 破碎細(xì)胞的常用方法及目的（選擇判斷） 機(jī)械破碎：研磨法（鼠肝、兔肝）、組織搗碎器法、超聲波法、凍融法 溶脹和自溶：溶脹（紅血球）、自溶 3. 化學(xué)處理（脂溶性溶劑或表面活性劑） 4. 生物酶降解（溶菌酶溶解細(xì)胞壁，滲透壓引起細(xì)胞膜破裂）

9、 第2章 沉淀法 常用的沉淀法 （1） 制備蛋白質(zhì)P21 鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、蛋白質(zhì)沉淀法（專一）、聚乙二醇沉淀法（專一）、選擇性沉淀法、結(jié)晶沉淀法 （2） 制備核酸P31 DNP/RNP 復(fù)合物的解聚、多糖等雜質(zhì)的消除、DNA與RNA的分離 第3章 吸附層析 1. 吸附層析的基本原理 在吸附層析法中，使用的固定相基質(zhì)是顆粒狀的吸附劑。在吸附劑的表面存在著許多隨機(jī)分布的吸附位點(diǎn)，這些位點(diǎn)通過范德華力和靜電引力與蛋白質(zhì)和核酸等生物分子結(jié)合，其結(jié)合力的大小與各種生物分子的結(jié)構(gòu)和吸附劑的性質(zhì)有密切關(guān)系。假如吸附劑對A的結(jié)合力小于B時，則B留在柱子上部，A移至下部。如果A的

10、分配系數(shù)小于B，則A在柱子上的移動速度大于B。因此混合物在層析柱中的分離過程，實質(zhì)上是吸附、解吸附、再吸附的連續(xù)過程，或者是在固定相與流動相之間連續(xù)分配的過程。 2. 吸附柱層析法P37 第4章 疏水層析 疏水層析的基本原理及一般操作P59 基本原理： 就球形蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)而言，其分子中的疏水性殘基數(shù)是從外向內(nèi)逐步增加的。疏水作用弱的物質(zhì)，用高濃度鹽溶液洗脫時，會被先洗脫下來。當(dāng)鹽溶液濃度降低時，疏水作用強(qiáng)的物質(zhì)才會隨后被洗脫下來。 一般操作：P60 層析柱的制備（層析柱規(guī)格、固定相、裝柱）——加樣與洗脫 第5章 離子交換層析 ★ 1. 離子交換層析的基本原

11、理及一般操作 基本原理：P64 離子交換劑是由載體、電荷基團(tuán)（或功能基團(tuán)）和反離子構(gòu)成的。它在水中呈不溶解狀態(tài)，能釋放出反離子。在此期間，它將與溶液中的其他離子或離子化合物相互結(jié)合，結(jié)合后本身的理化性質(zhì)仍保持不變。離子交換劑與溶液中的離子或離子化合物的反應(yīng)主要以離子交換方式進(jìn)行，或者借助離子交換劑上電荷基團(tuán)對溶液中離子或離子化合物的吸附作用進(jìn)行。這些過程都是可逆的。離子交換層析之所以能成功把各種物質(zhì)分開，其主要依據(jù)是離子交換劑對各種離子或離子化合物有不同結(jié)合力。 一般操作：P83 離子交換劑的處理、再生和轉(zhuǎn)型；分離物質(zhì)的交換；物質(zhì)的洗脫與收集 2. 常用離子交換劑的交換基團(tuán)

12、 離子交換樹脂按它的交換基團(tuán)分成陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂兩大類：陽離子交換樹脂又分為強(qiáng)酸性與弱酸性，前者具有的磺酸基交換基團(tuán)，適用于所有的酸性溶液,后者則是羧基、膦酸基或酚羥基,僅能用于中性至堿性溶液，但交換容量大，容易再生。陰離子交換樹脂又分為強(qiáng)堿性與弱堿性，前者帶有季胺基，適用于所有酸度的溶液，還能交換吸附弱酸；后者帶有叔胺基或仲胺基，僅能用于中性至酸性溶液。 3. 結(jié)合實驗給出多組分，分析分離結(jié)果（陰性陽性，分離前后順序） 第六章 凝膠過濾 ★ 基本原理和一般操作 基本原理：P98 凝膠過濾層析所用的載體是具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、篩孔直徑較一致，且呈珠狀顆粒的物質(zhì)。這種

13、物質(zhì)可以全部或者部分排阻某些大分子化合物于篩孔之外，而不能排阻某些小分子化合物，但可讓其在篩孔中自由地擴(kuò)散、滲透。在同一凝膠過濾柱上分離分子質(zhì)量不同的物質(zhì)時，由于流動相的作用，這些分離物質(zhì)將發(fā)生排阻和擴(kuò)散效應(yīng)。若將緩沖液連續(xù)傾入柱中，柱中物質(zhì)的排阻和擴(kuò)散效應(yīng)也將不斷發(fā)生，其最終結(jié)果是分子質(zhì)量大的物質(zhì)先從柱中流出，分子質(zhì)量小的物質(zhì)則后從柱中流出。 一般操作:P101 凝膠的選擇和處理、凝膠柱的制備、加樣與洗脫、凝膠柱的再生及保存 第7章 親和層析 ★ 1. 基本原理 親和層析是以親和吸附劑為固定相，以特異性溶液為流動相，對與配體具有親和力之有效成分進(jìn)行分離的過程。每對反應(yīng)物之間

14、都有一定的親和力。在親和層析中，特有的配體才能和匹配的生命大分子之間具有親和力，并產(chǎn)生復(fù)合物。且進(jìn)行反應(yīng)時呈液相狀態(tài)。實質(zhì)上親和層析是把具有識別能力的配體以共價鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)的載體上，制成親和吸附劑，或稱固相載體。而固化后的配體仍保持束縛特異物質(zhì)的能力。樣品中隊配體有親和力的物質(zhì)可借助靜電引力、范德華力以及結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)等作用吸附到固定相上，而無親和力或非特異吸附的物質(zhì)則被平衡緩沖液洗滌出來。然后恰當(dāng)?shù)馗淖兤胶饩彌_液的pH，或增加離子強(qiáng)度，或加入抑制劑等因子，即可把有效成分從固定相上解離下來。 2. 親和層析分離的三種情況 （1） 親和力較?。嚎梢赃B續(xù)用大體積平衡緩沖液進(jìn)行洗

15、脫，得到遲緩的大分子物質(zhì)峰。 （2） 親和力一般時：主要靠改變緩沖液的性質(zhì)使有效成分與配體間的親和力減小到足以分離的程度。 （3） 親和力較大時：可用與配體競爭的溶液或者用含蛋白質(zhì)變性劑的溶液進(jìn)行洗脫。 a.競爭性洗脫劑。專一性強(qiáng)，能洗脫出和配體特異結(jié)合的有效成分，洗脫時需要較大體積的洗脫液。 b.蛋白質(zhì)變性劑。即劇烈洗脫條件，洗脫下的有效成分需要經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚恚娇苫謴?fù)活性。 第8章 聚焦層析 基本原理：P133 該方法分離純化蛋白質(zhì)的依據(jù)是等電點(diǎn)的差異和離子交換行為。蛋白質(zhì)所帶電荷取決于它的等電點(diǎn)和層析柱中的pH。當(dāng)柱中的pH低于蛋白質(zhì)的pI時，蛋白質(zhì)

16、帶正電荷，且不與陰離子交換劑結(jié)合。而隨著洗脫劑向前移動，固定相中的pH是隨著時間變化的。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)移動至pH高于其pI的環(huán)境時，蛋白質(zhì)變?yōu)閹ж?fù)電荷，并與陰離子交換劑結(jié)合。由于洗脫劑的通過，蛋白質(zhì)周圍的環(huán)境pH再次低于pI時，它又帶正電荷，并從交換劑解吸附下來。隨著洗脫液向柱底的遷移，上述過程將反復(fù)進(jìn)行，于是各種蛋白質(zhì)就按各自的等電點(diǎn)大小被洗下來，從而分離。不同蛋白質(zhì)具有不同等電點(diǎn)，他們在被離子交換劑結(jié)合以前，移動之距離是不一樣的，洗脫出來的先后次序是按等電點(diǎn)大小排列的。蛋白質(zhì)按其等電點(diǎn)在pH梯度環(huán)境中進(jìn)行排列的過程叫做聚焦效應(yīng)。pH梯度的形成是聚焦效應(yīng)的先決條件。加入樣品后，它將迅速移動到與它等

17、電點(diǎn)相同的pH處，從此位置開始緩慢進(jìn)行吸附、解吸附，知道pH

18、品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，加快其移動速度。有益于提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等。 （3） 分離系統(tǒng) 固定相載體粒度小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)。載體粒度小、微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。有益于縮小譜帶寬度、提高分辨率。具恒溫器，通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時間，就能增加色譜柱效率。 （4） 檢測系統(tǒng) 紫外、示差折光、熒光檢測器 （5） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。 第10章 固定化的酶與微生物 1. 酶固定化的方法 載體結(jié)合法（物理吸附法、離子結(jié)合法、共價結(jié)合法）、

19、交聯(lián)法、包埋法 2. 固定化對酶的穩(wěn)定性、活性影響 P166 （1）活性降低（2）活性曲線和最適pH發(fā)生偏移（3）穩(wěn)定性優(yōu)于游離酶（4）米氏常數(shù)變化依情況而定 （5）可能增加抵抗氧化作用的性能（6）可能喪失對底物或生成物的選擇性，提高相對活性 第14章 生物芯片 1. 基因芯片的基本原理 ★ 基因芯片是將大量已知基因片段（與核酸印跡雜交相反，亦稱靶基因）以微陣列方式固定在支持物上，待測樣品用熒光試劑標(biāo)記制作成探針。當(dāng)探針與芯片上的靶基因雜交后，經(jīng)嚴(yán)格洗滌，去除未雜交或部分配對的探針DNA分子，用熒光檢測儀定量分析雜交信號強(qiáng)度。由于探針與靶基因完全配對時產(chǎn)生的熒光信號比含一個

20、或兩個錯配堿基的雜合分子高數(shù)十倍，因而精確測定熒光信號即可實現(xiàn)檢測的特異性。同時通過檢測每個靶基因分子的雜交信號強(qiáng)度，就可以獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。 2. 生物芯片的主要類型 基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、芯片實驗室 第15章 聚合酶鏈反應(yīng) △ 1.PCR的類型和基本原理 ★ （1）普通PCR 使用離體模板DNA進(jìn)行擴(kuò)增的，這種DNA是從組織或細(xì)胞中分離出來的。。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在與啟動子的參與下，根據(jù)復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在PCR實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和

21、復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。 （2） 原位PCR 使用細(xì)胞或組織的DNA作模板進(jìn)行擴(kuò)增的。并可用這種模板DNA來確定其生存細(xì)胞的類型，或在細(xì)胞中的位置，或生存細(xì)胞在組織中的百分比等。細(xì)胞經(jīng)固定液處理后，具有一定的通透性，PCR試劑，Taq聚合酶、引物等容易滲入。隨之開始原位PCR擴(kuò)增，雖然有少量產(chǎn)物可擴(kuò)散到細(xì)胞的周圍環(huán)境中，但大部分仍保留在細(xì)胞內(nèi)。因此，利用標(biāo)記引物在原位進(jìn)行PCR，即可借助直接顯色或用特異性探針與擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，獲得較滿意的檢測結(jié)果。 （3） 反轉(zhuǎn)錄PCR 擴(kuò)增真核生物基因時，需從mRNA開始，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄成cDNA后

22、，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，這一過程稱反轉(zhuǎn)錄PCR。提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用dT或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。 （4） 反向PCR 反向PCR可以對一段已知序列兩端的未知序列進(jìn)行擴(kuò)增分析。 這時選擇的引物雖然與核心DNA區(qū)兩末端序列互補(bǔ)，但兩引物3’端是相互反向的。擴(kuò)增前先用限制性內(nèi)切酶酶切樣品DNA，然后用DNA連接酶連接成一個環(huán)狀DNA分子，通過反向PCR擴(kuò)增引物的上游片段和下游片段。 （5） 不

23、對稱PCR 是用不等量的一對引物，PCR擴(kuò)增后產(chǎn)生大量的單鏈DNA(SSDNA).這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物，其比例一般為50～100∶1.在PCR反應(yīng)的最初10～15個循環(huán)中，其擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA，但當(dāng)限制性引物(低濃度引物)消耗完后，非限制性引物(高濃度引物)引導(dǎo)的PCR就會產(chǎn)生大量的單鏈DNA。獲得所需數(shù)目的單鏈后，即可應(yīng)用適當(dāng)引物對這種單鏈DNA進(jìn)行測序或制備探針。 （6） 巢式PCR 當(dāng)一對引物介導(dǎo)，一次擴(kuò)增極微量的目的DNA片段，難于滿足實驗需要時，可改用多對引物介導(dǎo)，進(jìn)行兩次或多次擴(kuò)增DNA片段，則能獲得良好的結(jié)果，即巢式PCR。巢式PCR是一種變異的P

24、CR，使用兩對PCR引物擴(kuò)增完整的片段。第一對PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在第一次PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在第一次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于第一次擴(kuò)增。巢式PCR的好處在于，如果第一次擴(kuò)增產(chǎn)生了錯誤片斷，則第二次能在錯誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率極低。因此，巢式PCR的擴(kuò)增非常特異。 （7） 彩色PCR 將引物5端用熒光物質(zhì)標(biāo)記后進(jìn)行PCR，即彩色PCR。通過彩色PCR合成的DNA具有熒光標(biāo)記物，該物質(zhì)在特定條件下會產(chǎn)生有色反應(yīng)。引物可用不同色彩的熒光試劑進(jìn)行標(biāo)記，PCR擴(kuò)增后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳或離心后，置凝膠或沉淀物與PE熒

25、光計的特定波長下激發(fā)，不同試劑將產(chǎn)生不同波長的發(fā)射光譜，用肉眼即可觀察到彩色譜帶或沉淀物。 2. 定量PCR與普通PCR的區(qū)別 熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實時熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的，而普通的PCR儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段，定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作。主要有以下4點(diǎn)區(qū)別：有定量功能；可以在反應(yīng)的任何時段觀察反應(yīng)產(chǎn)物的量；有無非特異性的產(chǎn)物；模板要求量低。 3. （熒光）定量PCR的常用染料或探針 SYBRGreenI、EB 第17章 生物傳感器 1. 生物電極的類型 單一電極（

26、酶電極）、復(fù)合電極（復(fù)合酶電極、復(fù)合微生物電極、酶-微生物電極） 2. 生物傳感器的構(gòu)成 敏感元件、換能器、信號放大裝置 第18章 電泳 ★ 1. 聚丙烯酰胺凝膠電泳基本原理 P327 聚丙烯酰胺凝膠是丙烯酰胺（單體）和甲撐雙丙烯酰胺（雙體，交聯(lián)劑）為材料，在催化劑作用下，聚合為含酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長鏈，在相鄰長鏈之間通過甲撐橋連接而形成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)。聚丙烯酰胺凝膠具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。 而SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子

27、量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。 2. SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳過程中異?，F(xiàn)象產(chǎn)生原因及解決方法 3. 雙向電泳（等電點(diǎn)聚焦） 復(fù)雜樣品中，若其中某些物質(zhì)的等電點(diǎn)或分子質(zhì)量相似，或等電點(diǎn)和分子質(zhì)量有互補(bǔ)作用時，用單向凝膠電泳將所含組分全部分開是不能奏效的。所以常常第一向電泳膠條轉(zhuǎn)至另一種凝膠介質(zhì)（pH和濃度與一向電泳膠不同）上進(jìn)行第二向電泳，才能使混合樣品得到有效分離。 4. 印跡法 P373 轉(zhuǎn)移電泳是將經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離出的蛋白質(zhì)譜直接轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，而形成固定相，并同時排除各種干擾物質(zhì)，保持其天然構(gòu)象和生物學(xué)活性，完成在凝膠中難以進(jìn)行的各種生物試驗。 5. 毛細(xì)管電泳 P364 以毛細(xì)管為分離通道、高壓電場為驅(qū)動力的電泳分離分析法。包括毛細(xì)管自由流動電泳、毛細(xì)管區(qū)帶電泳等。 在高電場強(qiáng)度作用下，毛細(xì)管中的待測物質(zhì)可按其分子質(zhì)量、電荷、淌度等因子的差異得到有效的分離。 專心---專注---專業(yè)