甘肅省武威市高中生物 第3章 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 3.1 菊花的組織培養(yǎng)課件2 新人教版選修1 .ppt

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1、課題1 菊花的組織培養(yǎng),學(xué)習(xí)目標(biāo) 熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程。 理解細(xì)胞分化、脫分化及再分化概念。 課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程。 課題難點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過(guò)程中使用的無(wú)菌技術(shù)。細(xì)胞分化，脫分化，再分化。,細(xì)胞分化：,個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和 生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程。,特定時(shí)空下基因的選擇性表達(dá)。,形成各種組織器官。,③結(jié)果：,②原因：,①定義：,？什么是細(xì)胞分化？細(xì)胞分化的原因和結(jié)果？,一、基礎(chǔ)知識(shí),(一)植物的組織培養(yǎng)的基本過(guò)程,2.脫分化、再分化？愈傷組織（形成的？特點(diǎn)？）,②愈傷組織是通過(guò)細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，高度液泡化呈無(wú)定形狀態(tài)的薄

2、壁細(xì)胞。,①脫分化：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程。,③再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫再分化。,2.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)：,細(xì)胞全能性：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。,細(xì)胞全能性表達(dá)條件：,2.一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件,1.外植體：從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官,二、植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程,,離體器官、組織或細(xì)胞,,,,脫分化,,愈傷組織,,,再分化,叢芽、根,,植物體,,三、影響植物組織培養(yǎng)的因素?,不同植物的組織培養(yǎng)難度不同 同一

3、種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同,大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等 植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等,1、外植體的選取,2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基),菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問(wèn)題？,討論：你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？,答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽； 蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓； 甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)的需求。 微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培

4、養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。,,3、不同植物激素濃度，使用順序和使用量,4、消毒 在培養(yǎng)的整個(gè)過(guò)程中，都需要是一個(gè)無(wú)菌環(huán)境原因：,5、pH、溫度、光照 菊花： pH=5.8 溫度控制在18—22℃ 每日光照12h,,活動(dòng)： 用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給描述出來(lái)?（提示：怎樣配制MS培養(yǎng)基?外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行?接種、培養(yǎng)、移栽時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題? ）,制備MS固體培養(yǎng)基,外植體消毒,接種,培 養(yǎng),栽 培,,,,,四、實(shí)驗(yàn)操作,移 栽,,,沖洗—酒精—無(wú)菌水沖洗—氯化汞—無(wú)菌水沖洗至少三次之上,二、實(shí)驗(yàn)操作,（一）制備MS固體培養(yǎng)基,MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般

5、使用4。C保存配制好的培養(yǎng)基母液來(lái)制備,1、配置各種母液,①無(wú)機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存,②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液,③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量,2、配置培養(yǎng)基,①定容,② 調(diào)PH,③培養(yǎng)基的分裝,3、滅菌,分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,1、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝,（二）外植體消毒,2、消毒,①流水沖洗,菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右,② 酒精處理—無(wú)菌水沖洗,用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放

6、入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗,③氯化汞—無(wú)菌水沖洗至少三次之上,取出后用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液,（三）接種,1、接種室消毒,2、無(wú)菌操作要求,操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。,3、材料的切取和接種,污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒， 酒精或新潔爾滅擦洗工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘,4、接種注意事項(xiàng),①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體

7、積分?jǐn)?shù)為75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種,②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分和光照條件,③插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分,（四）培養(yǎng),無(wú)菌箱中培養(yǎng)，定期消毒，保持適宜的溫度，光照,（五）移栽,（六）栽培,幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花,移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日,1、打開封口膜,2、清洗轉(zhuǎn)移,用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到

8、消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間,珍珠巖：固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培,三、課題延伸,1、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng),2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季,思 考,？,在整個(gè)操作過(guò)程中，是如何來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌環(huán)境的？,1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌） 2、外植體的消毒（酒精、氯化汞） 3、接種的無(wú)菌操作（酒精、酒精燈——灼燒） 4、無(wú)菌箱中的培養(yǎng)； 5、移栽到消過(guò)毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析 （二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再 分化 （三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄 （四）生根苗的移栽是否合格,總

9、結(jié)植物組織培養(yǎng)過(guò)程:,離體組織或細(xì)胞,植物體,細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素,愈傷組織,芽,根,細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素,細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素,,植物細(xì)胞培養(yǎng),,不需要光,,需要光,基礎(chǔ)知識(shí),（一）植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程,植物的組織培養(yǎng)技術(shù),不同的植物組織 同一植物的不同材料 營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境條件 植物激素,（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素,1.制備MS固體培養(yǎng)基 1.1、配制母液 1.2、配制培養(yǎng)基 1.3、滅菌 2.外植體消毒 3.接種 4.培養(yǎng) 5.移栽 6.栽培,實(shí)驗(yàn)操作,本課題內(nèi)容小結(jié),,,,,菊花組織培養(yǎng),基礎(chǔ)知識(shí),實(shí)驗(yàn)操作,植物體的組織培養(yǎng),影響組織培養(yǎng)的因素,,細(xì)胞分化 細(xì)胞全能性 組織培養(yǎng)過(guò)程,營(yíng)養(yǎng) 激素 環(huán)境條件,MS固體培養(yǎng)基制備 外植體消毒 接種 培養(yǎng) 移栽 栽培,思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？,答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒(méi)有被雜菌污染。,