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1、室內(nèi)空氣中細菌的測定,——平皿暴露沉降法,,目的：學習和掌握平皿暴露沉降法測定公共場所空氣中細菌的總數(shù)。評價居室的衛(wèi)生狀況,理論依據(jù)和實際應用：室內(nèi)空氣中的微生物主要來源是人們在室內(nèi)的生活和活動，使微生物隨飛沫與懸浮顆粒物飛揚于空氣中。所以室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量的多少取決于室內(nèi)衛(wèi)生狀況、居住密度、居民健康情況、人們的活動情況、室內(nèi)通風效果等。居住密度大、活動頻繁、通風不良時，細菌總數(shù)就多。所以它可以代表居室一般衛(wèi)生狀況的意義；,理論依據(jù)和實際應用：附著于室內(nèi)懸浮顆粒物和唾液與痰液飛沫的微生物中含有一定數(shù)量的致病微生物（溶血性鏈球菌、結核桿菌、白喉桿菌、肺炎球菌、金黃色葡萄球菌、流感病菌等），可
2、對人致?。ㄔ诳諝鉂穸却?、通風不良、陽光不足的情況下，可保持較長的生存時間和致病性），因此，有必要對室內(nèi)空氣中的微生物數(shù)量作出限制。以病原體作為直接的評價指標，在技術上還有一定難度，所以目前仍多用細菌總數(shù)作為居室空氣細菌學的評價指標。,三、原理：空氣中附著于塵?；蝻w沫小滴上的細菌，經(jīng)過一段時間，可自然沉降于培養(yǎng)基的表面上，經(jīng)培養(yǎng)后，計數(shù)其生長的菌落數(shù)，再按公式推算出每立方米空氣中的細菌數(shù)。,四、實驗準備：（一）儀器與設備：高壓蒸汽滅菌器電熱恒溫干燥箱恒溫培養(yǎng)箱電冰箱玻璃平皿及制備培養(yǎng)基用的一般設備,（二）試劑與材料：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：（1）成份：蛋白胨10克牛肉浸膏3克氯化鈉5克磷酸二氫鈉1克瓊脂
3、15～20克蒸餾水1000毫升,,（二）試劑與材料：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：（2）制法：將上述成分混合后，加熱溶解。調(diào)節(jié)PH值7.8～8.0。過濾除去沉渣，分裝于三角燒瓶中，經(jīng)121℃（103kPa）高壓蒸氣滅菌20分鐘，然后傾注適量（15～20毫升）于已滅菌處理的平皿內(nèi)，制成營養(yǎng)瓊脂平板備用。若當天不用，應置冰箱內(nèi)保存。,五、操作步驟：（一）制作營養(yǎng)瓊脂平板（無菌操作）操作者面前點燃酒精燈打開已滅菌處理的平皿傾注適量營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（15～20毫升）冷凝（大約15分鐘）,（二）選擇采樣點的要求：1．采樣點的數(shù)量根據(jù)監(jiān)測室內(nèi)面積大小和現(xiàn)場情況而確定，以期能正確反映室內(nèi)空氣污染物的水平。原則上小于50㎡的
4、房間應設（1～3）個點；50㎡～100㎡設（3～5）個點；100㎡以上至少設5個點。在對角線上或梅花式均勻分布。2．采樣點應避開通風口，離墻壁距離應大于0.5m。3．采樣點的高度：原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對高度0.5m～1.5m之間。,（三）采樣方法1.選擇好采樣點后，將營養(yǎng)瓊脂平板置于這些選測的部位，并將皿蓋揭開，使平皿內(nèi)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面暴露于空氣中5分鐘。蓋上皿蓋，將平板倒轉，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后計數(shù)菌落數(shù)。2.計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面上所生長的菌落數(shù)，并求出全部采樣點的平均菌落數(shù)。,六、結果與計算：1、奧梅梁斯基公式：100cm2的培養(yǎng)皿讓空氣沉降5分鐘，培養(yǎng)出的
5、細菌數(shù)相當于10升空氣中的細菌數(shù)。X=（N100100）/лR2式中：X——每立方米空氣中的細菌數(shù)N——平板直接計數(shù)的平均菌落數(shù)R——平皿的底面積半徑（cm）：9cm,2、直接計數(shù)：CFU（菌落形成單位/皿），注明（沉降法，皿徑9cm）,,3、將五個采樣點的菌落數(shù)平均計算出室內(nèi)平均的菌落數(shù)。12345平均細菌數(shù)（CFU/皿）,,,,感應式菌落計數(shù)儀,九、評價：室內(nèi)空氣中細菌總數(shù)規(guī)定撞擊法≤4000cfu/m3;沉降法≤45cfu/皿。（室內(nèi)空氣中細菌總數(shù)衛(wèi)生標準GB/T17093-1997）,,旅店業(yè)衛(wèi)生標準GB9663-1996,醫(yī)院空氣消毒效果和污染狀況的評價：空氣消毒效果的比較應在消毒前
6、后取樣進行培養(yǎng)，如消毒后空氣中細菌數(shù)明顯下降，說明消毒效果好，下面規(guī)定適用GB15982——1995規(guī)定：Ⅰ類區(qū)域細菌總數(shù)≤10cfu/m3，且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅱ類區(qū)域細菌總數(shù)≤200cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域細菌總數(shù)≤500cfu/m3,且未檢出致病菌為消毒合格。,Ⅰ類環(huán)境包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房只能采用層流通風才能空氣中的微生物減到此標準以下。Ⅱ類環(huán)境包括普通手術室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護性隔離室、供應室潔凈區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房、采用循環(huán)風紫外線空氣消毒器或靜電吸附式空氣消毒器，這類均為有人房間，必須采用對人無毒無害且可連續(xù)消毒才能使空
7、氣中的微生物減到此標準以下。Ⅲ類環(huán)境包括兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病房室和房間，采用紫外線消毒，化學消毒劑熏蒸或噴霧消毒。,十、注意事項：1.若測定空氣中的溶血性鏈球菌及綠色鏈球菌，則用血瓊脂平板，其他操作及計算方法與細菌總數(shù)測定方法相同。2.平皿的底面積直徑不宜小于9cm。3.選擇采樣點時，應盡量避開空調(diào)、門窗等氣流變化較大處。整個采樣過程中，應動作輕緩，避免揚起灰塵，并要注意無菌操作。4.采樣中打開皿蓋時，可將皿蓋向下，切忌血蓋向上而暴露于空氣中，影響采樣結果。暴露5分鐘后，應按打開皿蓋的順序，蓋上皿蓋，帶回實驗室置培養(yǎng)箱，37℃、24小時培養(yǎng)后計數(shù)菌落。,補充：1.撞擊式空氣采樣法：用空氣動力泵抽氣進入狹縫，使氣流速度加快，撞擊于正在轉動的平皿上。并粘附其上，培養(yǎng)。CFU/m32.吸收法：氣流經(jīng)過一定的吸收液，培養(yǎng)。3.暴露法：CFU/皿。缺點：顆粒物質(zhì)運動符合stokes定律，由于人流、季節(jié)、白天細菌數(shù)>晚上，且技術定量不同等可造成誤差。,
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