黃酒中氨基酸測(cè)定方法 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）

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中 華 人 民 共 和 國 輕 工 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn) B/T ××××— ×××× 黃酒中氨基酸的測(cè)定方法 of in 征求意見 稿） ×××× -×× -××發(fā)布 ×××× -×× -××實(shí)施 工業(yè)與信息化部 發(fā)布 ××××— ×××× I 目 次 前言 .................................................................................. 范圍 ................................................................................. 1 2 規(guī)范性引用文件 ....................................................................... 1 3 原理 ................................................................................. 1 4 試劑 ................................................................................. 1 5 儀器和材料 ........................................................................... 1 6 分析步驟 ............................................................................. 2 7 結(jié)果計(jì)算 ............................................................................. 3 8 重復(fù)性 ............................................................................... 3 附錄 A ................................................................................ 4 附錄 B ................................................................................ 5 ××××— ×××× 言 本標(biāo)準(zhǔn)由全國食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位： 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人： ××××— ×××× 1 黃酒中氨基酸的測(cè)定方法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了黃酒中天冬氨酸 (谷氨酸 (絲氨酸 (甘氨酸 (組氨酸 (精氨酸 (蘇氨酸 ( 4丙氨酸 (脯氨酸 (酪氨酸 (纈氨酸 (蛋氨酸 (異亮氨酸 (亮氨酸 (苯丙氨酸 (色氨酸（ 賴氨酸 ( 18種氨基酸的高效液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于黃酒中天冬氨酸 ( 賴氨酸 ( 18種氨基酸的測(cè)定，檢出限為 。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)則和實(shí)驗(yàn)方法 3 原理 采用 異硫氰酸苯酯 衍生劑與黃酒中 氨 基酸進(jìn)行衍生 反應(yīng) ， 氨基酸衍生產(chǎn)物 在 特定 紫外 波長有強(qiáng) 吸收 ， 經(jīng) 外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量分析。 4 試劑 腈 : 色譜純。 醇：色譜純。 硫氰酸苯酯 (≥99%)。 硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液：移取 硫氰酸苯酯 ( 10量瓶中，用乙腈定容至刻度。 乙胺：分析純。 乙胺 的乙腈 溶液：移取 乙胺 ( 10 量瓶中，用乙腈定容至刻度。 酸 鈉：分析純。 己烷：分析純。 乙酸（ 。 0%乙酸溶液：取 1乙酸 (用高純水 稀釋到 10 鹽酸 :分析純。 .1 鹽酸溶液：取 鹽酸 （ ,用水定容至 100 基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ： 純度 ≥98%。 準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品 確至 ， 用 0.1 鹽酸（ 解后 ， 定容至 10勻，使其濃度為 儲(chǔ)存在 下有效期為 1 年。 準(zhǔn)工作液 ： 準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（ 用水稀釋，依次配制成 10μg/20μg/40μg/0μg/80μg/標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用 。 ： 6682 二級(jí)水。 5 儀器和材料 效液相色譜帶有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。 ××××— ×××× 2 析天平（精度 渦混合器。 料離心管。 孔有機(jī)濾膜：孔徑 m。 6 分析步驟 品 衍生 取黃酒樣品 1.0 水定容至 10 200 μ于 2心管中 ,再加入異硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液 (00 μL、 三乙胺 的乙腈 溶液 ( 100 μL， 混勻 ， 室溫下放置 1 入 30 μ液 （ 取凈化 在離心管中加入 400 μ,漩渦混合器振蕩 1 靜置 10 注射器吸取下層溶液 ,收集 濾液 待 測(cè)定。 準(zhǔn)樣品前處理 分別 移取 200 μ準(zhǔn)工作液 （ 。 置于 2心管中 ,加入異硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液 (00 μL、 三乙胺 的乙腈 溶液 ( 100 μL， 混勻 ， 室溫下放置 1 入 30 μ液 （ 。按 譜條件 譜柱： 譜柱 （ 250 .6 5 μm） 。 動(dòng)相及洗 脫程序見表 1。 表 1 梯度洗脫順序 時(shí)間 / 乙 酸鈉 (含 三乙胺 , 乙腈 / % 水 / % 起始 90 5 5 3 90 5 5 12 85 10 5 25 81 10 9 26 30 65 28 7 40 60 32 8 45 0 80 20 53 0 80 20 54 0 10 90 59 0 10 90 60 90 5 5 70 90 5 5 速： 1.0 樣 體積 ： 10μ L。 溫 ： 38℃ 。 測(cè)波長： 254 性 根據(jù)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間，與待測(cè)樣品中組分的保留時(shí)間 進(jìn)行定性 ， 定性色譜圖參加附錄 B。 ××××— ×××× 3 標(biāo)法 定量 將 系列 氨基酸使用溶液（ 按照 色譜條件（ 行測(cè)定，以 各 標(biāo)準(zhǔn)工作液 峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo) ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 將 定 各 氨基酸 色譜峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品中的氨基酸濃度。 7 結(jié)果計(jì)算 品中各組分的含量按式（ 1）計(jì)算獲得： 樣品中各組分的含量按下式計(jì)算 ： 10 0010 00??? … ……………………………………… （ 1） 式中 ： X— 樣品中各組分的含量，單位為（ ） ； C— 從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中組分的含量，單位為（ ） ； F— 樣品 稀釋倍數(shù) 為 10； 行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留 2 位有效數(shù)字。 8 重復(fù)性 在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于 10%。 ××××— ×××× 4 附 錄 A （資料性附錄） 18 種氨基酸的分子式和相對(duì)分子量 18種氨基酸的分子式和相對(duì)分子量見表 表 8種氨基酸的分子式和相對(duì)分子量 名 稱 英文名稱 分子式 相對(duì)分子量 天冬氨酸 氨酸 氨酸 3氨酸 2氨酸 6氨酸 6氨酸 444氨酸 氨酸 氨酸 9氨酸 5氨酸 5亮氨酸 6氨酸 6丙氨酸 9氨酸 11氨酸 6B/T ××××— ×××× 5 附 錄 B （資料性附錄） 18 種氨基酸 標(biāo)準(zhǔn)樣品 的 色譜圖，見圖 圖 酒對(duì)照樣品的 色譜圖