動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚A含量的測(cè)定 編制說(shuō)明

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動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 編制說(shuō)明） 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所 2013 年 10 月 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 2 目 錄 1 編制過(guò)程 國(guó)內(nèi)外的概況 方法研究?jī)?nèi)容及結(jié)果 化特性 品前處理 標(biāo)物流出體積的確定 動(dòng)相 的選擇 譜條件的優(yōu)化 0 性范圍 0 準(zhǔn)曲線 的 相對(duì)響應(yīng)因子 0 出限 與 定量限 1 收率與精密度 法的可行性 2 際考核樣驗(yàn)證試驗(yàn) 3 4 主要參考文獻(xiàn) 物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 3 1. 編制經(jīng)過(guò) “動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的測(cè)定 ”地方 標(biāo)準(zhǔn)制訂項(xiàng)目由 湖北省 衛(wèi) 生 與 計(jì) 劃 生 育 委 員 會(huì) 立項(xiàng)（ ），該測(cè)定方法的研究由 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所 承擔(dān)。在充分收集和分析國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有資料的基礎(chǔ)上，經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)研、實(shí)驗(yàn)室方法研究、現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)、資料整理分析統(tǒng)計(jì)，完成征求意見(jiàn)稿?，F(xiàn)將該標(biāo)準(zhǔn)方法制訂的依據(jù)作如下說(shuō)明。 2．國(guó)內(nèi)外的概況 六溴環(huán)十二烷 (和四溴雙酚 A (， 世界上消費(fèi)量最大的兩種 溴系阻燃劑，廣泛應(yīng)用于聚合物生產(chǎn)、印刷電路板阻燃、建筑隔熱板材、軟墊家具、室內(nèi)裝潢紡織品等領(lǐng)域。 2010年全球 3000 噸［ 1］， 2004年 70000 噸［ 2］。 臟毒性、神經(jīng)毒性和內(nèi)分泌毒性， 可導(dǎo)致老鼠肝臟增重、甲狀腺增大等 ，而 2001年 5月聯(lián)合國(guó)環(huán)境規(guī)劃署（ 稱斯德哥爾摩簽署了具有劃時(shí)代的意義關(guān)于持久性有機(jī)污染物 (國(guó)際公約《斯德哥爾摩公約》，是人類保護(hù)環(huán)境的一個(gè)里程碑 [3]。作為阻燃劑市場(chǎng)上最常見(jiàn)的溴系阻燃劑首當(dāng)其充與 2013年 5月，聯(lián)合國(guó)《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》（ 票一致通過(guò)一項(xiàng)禁令：在全球范圍內(nèi)禁止生產(chǎn)和使用六溴環(huán)十二烷（ 這標(biāo)志著六溴環(huán)十二烷成為繼四溴聯(lián)苯醚和五溴聯(lián)苯醚之后，又一個(gè)列入《公約》禁用化學(xué)制品黑名單的溴系阻燃劑 [4]。潛在的 溴雙酚 A(短鏈氯化石蠟 (溴代二噁英、多氯代萘 (德克隆 ( [5]。 含有六個(gè)溴原子的環(huán)狀化合物，有多種異構(gòu)體 。 點(diǎn)在160～ 190 之間，具有對(duì)熱和紫外光的穩(wěn)定性好、用量低、阻燃效果好和 對(duì)材料物理性能影響小等特點(diǎn)； 是一種添加型阻燃劑，可以通過(guò)生產(chǎn)、使用和產(chǎn)品的廢棄而進(jìn)入到環(huán)境中，被廣泛用作多溴聯(lián)苯醚 (替代品。歐洲主要用于及紡織品涂層阻燃處理上。我國(guó)主要用于發(fā)泡聚苯乙烯、聚丙烯纖維、苯乙烯樹(shù)脂、聚乙烯、聚碳酸酯等的阻燃添加劑，及對(duì)織物、粘合劑、動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 4 涂料及不飽和聚酯樹(shù)脂進(jìn)行阻燃處理等。研究表明 有很 強(qiáng)的生物蓄積性和持久性，被認(rèn)為是一種新型的環(huán)境持久有機(jī)污染物，已經(jīng)受到了國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。 導(dǎo)致血清甲狀腺激素濃度下降、抑制神經(jīng)遞質(zhì)正常吸收、引起肝組織病理學(xué)改變等生物毒性，歐盟在 將其定為管控物質(zhì)， 類為高關(guān)注度物質(zhì)，同時(shí)持久性有機(jī)污染物審查委員會(huì)已 將其列入《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》。 遍存在于環(huán)境中，生長(zhǎng)在格蘭陵 (斯瓦爾巴特群島 (北極熊、海鳥(niǎo)及海豹身上均可檢測(cè)到 商品 3 種非對(duì)映異構(gòu) 體 (α， β， γ組成， 結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 1。 其中 γ含量最高，為 75%～ 89%， α含量為 10%～ 13%， β 12%。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在環(huán)境樣品 (土壤、污泥、污水等樣品 )中 總 60%以上；在空氣中的 要為α γβ量很少；而在水生生物和鳥(niǎo)類體內(nèi)組織里α 量的 80%以上。可見(jiàn)對(duì) 危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)需要對(duì) 3 種異構(gòu)體分別進(jìn)行精確定量。 構(gòu)中有兩個(gè)活 潑的酚羥基，呈強(qiáng)極性 ,結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖 2。 目前使用量最大的一種溴系阻燃劑，其總用量約占全球阻燃劑用量的 1/3，年消耗量達(dá) 120000 T。它被廣泛應(yīng)用于電子電機(jī)設(shè)備中，如印刷電路版和塑料零件中，以強(qiáng)化阻燃防火的功能，全球有超過(guò) 70％的電子電機(jī)設(shè)備含有 盡管它是反應(yīng)型阻燃劑，但是在產(chǎn)品中仍然有大量的非聚合的 在，并且有可能釋放、污染環(huán)境。由于 甲狀腺荷爾蒙 (結(jié)構(gòu)相似， 現(xiàn)階段被認(rèn)為是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物。有研究表明， 夠與人類的轉(zhuǎn)甲狀腺 素蛋白 ((前白蛋白 )緊密結(jié)合 ,是一種免疫毒素。 (a) (b) (c) 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 5 圖 1 α、 β、 γ構(gòu)示意圖， (a) α (b) β(c) γ H 3C H 3B B rB B r 圖 2 構(gòu)示意圖 2007 年 6 月，挪威污染控制管理局向世界貿(mào)易組織（ 報(bào)提議，一旦產(chǎn)品中某些特定物質(zhì)的含量大于或等于最高限量時(shí)應(yīng)嚴(yán)格 控制該類消費(fèi)產(chǎn)品的生產(chǎn)、進(jìn)口、出口和銷售。 挪威污染控制管理局 發(fā)布了《消費(fèi)性產(chǎn)品中禁用特定有害物質(zhì)》禁令，即 令，該指令于 2007 年 12 月 15 日通過(guò)， 2008 年 1 月 1 日生效。規(guī)定建議限制 的 18 種物質(zhì) 中包括 令規(guī)定限量為 限量為 1％。我國(guó)目前沒(méi)有 量標(biāo)準(zhǔn)。 目前國(guó)內(nèi)沒(méi)有針對(duì) 項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)， 目前， 分析方法在前處理方面一般采取酸化硅膠或濃硫酸或凝膠色譜分離法 (去脂肪，再用硅膠柱 /酸化硅膠柱凈化；分析 結(jié)構(gòu)不難發(fā)現(xiàn)， 弱極性，所以洗脫液一般選取弱極性的混合溶劑正己烷 :二氯甲烷 (1:1， v/v)；儀器檢測(cè)方面， 種異構(gòu)體的分析測(cè)定基本上是采用 針對(duì)水體、土壤、空氣等環(huán)境基質(zhì) 方面有較完善的前處理方法，即索式提取后采用固相萃取進(jìn)行純化； 而針對(duì)動(dòng)物性基質(zhì)前處理方法的報(bào)道較少 。常見(jiàn)的固相萃取 (化法利 用的是目標(biāo)物極性的不同來(lái)達(dá)到分離的目的，然而 種極性強(qiáng)的物質(zhì)會(huì)與硅膠牢固結(jié)合，所以需要采取極性強(qiáng)的有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等來(lái)洗脫 。在 儀器檢測(cè)方面， 單快捷，且靈敏度較高。 總體來(lái)說(shuō)，目前單獨(dú)對(duì) 分析方法已經(jīng)較為成熟了。由于兩種物質(zhì)的用途大，用量廣，具有一定的危害且分析檢測(cè)方法相近，故 考慮將這兩種物質(zhì)進(jìn)行同時(shí)分析。 施致雄等 [6]建立了一套同時(shí)測(cè)定 動(dòng)物性食品中 品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 6 和 超高效液相色譜 S)的測(cè)定方法，前處理方面采取自動(dòng) 脂結(jié)合濃硫酸脫脂的凈化方法，洗脫劑選取 正己烷 :二氯甲烷 (1:1，v/v)，實(shí)驗(yàn)證明 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密 度均符合痕量檢測(cè)的要求； 然而凈化方法采取濃硫酸脫脂，可能 會(huì) 產(chǎn)生 安全性、前處理過(guò)程中發(fā)生 乳化現(xiàn)象 從而 影響檢測(cè) 結(jié)果等問(wèn)題。 對(duì)于 由于他們的生物蓄積性和脂溶性， 于食物鏈較高點(diǎn)的動(dòng)物和人類體內(nèi)的富集程度相對(duì)環(huán)境基質(zhì)要 高， 有的甚至高出上千倍。 因此，需要建立一個(gè)適合各種食品 (主要為動(dòng)物源性食品 )的 方便、 快捷 、 安全且 高靈敏 的 檢 測(cè)方法來(lái)滿足同時(shí)對(duì) 便今后對(duì)這兩種物質(zhì)的檢測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)水平的評(píng)估 ，保障湖北及全國(guó)動(dòng)物源性食品質(zhì)量安全。 本標(biāo)準(zhǔn)在現(xiàn)有的取穩(wěn)定性同位素稀釋技術(shù)，在動(dòng)物樣品中加入 13用索氏提取法提取動(dòng)物基質(zhì)中目標(biāo)化合物，用自制的酸化硅膠固相萃取柱凈化， 高效液相色譜 質(zhì)譜(S)的多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè) (式進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量，實(shí)現(xiàn)了對(duì)種 、 β、 γ 同時(shí)測(cè)定，從而為 險(xiǎn)水平評(píng)估 工作奠定基礎(chǔ)。 3 方法研究?jī)?nèi)容及結(jié)果 化性質(zhì) 六溴環(huán)十二烷： 1,2,5,6,9,10： 3194子量： 子式： 四溴雙酚 A： 3,3,5,5： 79子量： 子式： 品前處理 采用索氏提取的方法提取樣品， 自制 酸化硅膠固相萃取柱凈化 提取液。 具體操作如下： 干凈的固相萃取玻璃 柱底部塞一小撮棉花，從下往上依次倒入 1 無(wú)水硫酸鈉、 5 g 硅膠、 15 g 44%酸化硅膠、 5 g 硅膠、 1 無(wú)水硫酸鈉。用洗耳球輕震管壁以使填料表面水平，正己烷倒入管內(nèi)排除氣泡后，再用200 己烷活化柱子備用。將提取的樣品旋蒸至近干，用正己烷復(fù)溶，每次動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 7 2~4 入酸化硅膠柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 3~4 次， 100 己烷淋洗去除多余雜質(zhì)， 100 己烷 :二氯甲烷混合溶液 (1:1， v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2~4 復(fù)清洗燒瓶 3~4 次，轉(zhuǎn)移至 10 管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μ渦振蕩 1 以上提取凈化方法針對(duì)魚(yú)肉、雞蛋、牛奶等固體、半固態(tài)和液態(tài)樣品，而對(duì)于油脂樣品，如植物油，則不需要索式提取，直接 1~2 加內(nèi)標(biāo) 混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 B 200 μ L， 100 00 二氯甲烷混合溶液 (1:1， v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2~4 復(fù)清洗燒瓶 3~4次，轉(zhuǎn)移至 10 氣吹干后加入 200 μ 渦振蕩 1 本方法 動(dòng)物源性食品的提取 選擇了傳統(tǒng)的索氏提取方法，索氏提取雖然費(fèi)時(shí)費(fèi)溶劑，但是索氏提取裝置簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，操作簡(jiǎn)單，洗脫效率與回收率高，也是540（索式萃取法） 中使用的標(biāo)準(zhǔn)方法。 查閱文獻(xiàn)試驗(yàn)對(duì)比了 5 種凈化方法后， 最終 采用的是 自制酸化硅膠固相萃取柱 凈化法 。 采用理由如下： 在凈化過(guò)程中，去除動(dòng)物源性食品樣品中的油脂是最為重要的一步，如果不能有效地除盡脂肪，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果且污染儀器；如果在除去油脂的同時(shí)造成了目標(biāo)物的損失同樣會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 現(xiàn)階段除脂方法主要分兩類，一類是破壞性方法，如酸化硅膠處理、硫酸處理等；另一類是非破壞性方法，如凝膠滲透色譜(，吸附色譜等。絕對(duì)回收率衡量的是整個(gè)的分析方法對(duì)目標(biāo)物會(huì)造成多大的損失。作為痕量分析方法，一般要求其值大于 50%。對(duì)于本檢測(cè)方法，能滿足 時(shí)分析的要求有兩點(diǎn)：一是能將樣品中的油脂能否有效被清除；二是兩種物質(zhì)經(jīng)前處理之后絕對(duì)回收率均能達(dá)到 50%以上，以此來(lái)評(píng)判方法的可行與否。在 采用金龍魚(yú)植物油為空白基質(zhì)，加入 合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 B 作為模擬樣品， 5 種 凈化方法 及 效果 如下： 方法 1 酸化硅膠柱 。 于干凈的固相萃取玻璃柱底部塞一小撮棉花，從下往上依次倒入 1 無(wú)水硫酸鈉、 5 g 硅膠、 15 g 44%酸化硅膠、 5 g 硅膠、 1 洗耳球輕震管壁以使填料表面水平，倒入正己烷排盡氣泡，再用 200 己烷活化柱子備用。 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 8 將提取的樣品旋蒸至近干，用正己烷復(fù)溶，每次 2-4 入酸化硅膠柱上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 3， 100 己烷淋洗去除多余雜質(zhì)， 250 己烷 :二氯甲烷 (1:1， v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2-4 復(fù)清洗燒瓶 3，轉(zhuǎn)移至 10 管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μ渦振蕩 1 經(jīng)三次平行測(cè)定知 絕對(duì)回收率可達(dá) 50%以上，但 回收率只有 15%主要原因可能是 活潑酚羥基的存在，硅膠會(huì)與其牢固結(jié)合，導(dǎo)致洗脫液不能將其有效地洗脫下來(lái)，因此方法 1 不能滿足分析需要。 方法 2 手動(dòng)填裝 于燒杯中用甲苯將活化的 即倒入干凈的玻璃管 (50 0 ，再接著用甲苯將 殘留的填料混勻倒入玻璃管，如此重復(fù)多次，待填料沉淀下來(lái)與液相分層后，用環(huán)己烷 :乙酸乙酯混合溶液 (1:1， v/v)置換出甲苯，備用。 將提取好的樣品用環(huán)己烷 :乙酸乙酯混合溶液 (1:1， v/v)復(fù)溶，每次 2-4 入 上部，如此重復(fù)清洗燒瓶 3， 400 己烷 :乙酸乙酯 (1:1， v/v)洗脫，收集 190間的洗脫液 (之前的洗脫液中不含目標(biāo)物 )，旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2-4 復(fù)清洗燒瓶 3，轉(zhuǎn)移至 10 管，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?200 μ渦振蕩 1 采用該方法時(shí)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象為接收液旋蒸后燒瓶?jī)?nèi)仍有極少量粘稠油分，在氮吹干過(guò)后現(xiàn)象更加明顯，該現(xiàn)象表明此方法不能完全除盡脂肪，需要進(jìn)行進(jìn)一步凈化才能進(jìn)行后續(xù)測(cè)定。 方法 3 濃硫酸處 理 [6]。 將提取好的樣品用正己烷復(fù)溶，每次 2-4 此重復(fù)清洗燒瓶 3并至 50 入過(guò)量的濃硫酸，渦旋震蕩 1 3000 上層有機(jī)層轉(zhuǎn)移至試管中，旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，每次 2-4 復(fù)清洗燒瓶 3移至 10 氣吹干后加入 200 μ渦振蕩 1 該方法實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象為加入濃硫酸充分搖勻并離心之后，上清液與濃硫酸層中間會(huì)有一層橘黃色的乳狀物出現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)該乳化現(xiàn)象的嚴(yán)重程度與絕對(duì)回收率成負(fù)相關(guān)，采用加鹽去乳化處理會(huì)與濃酸反應(yīng)釋放氣體，導(dǎo)致溶液噴出。分析其原因是動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 9 由于油分遇到強(qiáng)酸會(huì)發(fā)生乳化現(xiàn)象，導(dǎo)致部分有機(jī)層與濃硫酸層不能有效分離，而加鹽會(huì)與濃硫酸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)釋放出氣體。雖然 得到較好的回收率 (40%，但需考慮到不 同樣品基質(zhì)復(fù)雜程度不同，若有些樣品遇強(qiáng)酸發(fā)生嚴(yán)重的乳化反應(yīng)，回收率就不一定能滿足分析要求了，況且此方法要多次連續(xù)的進(jìn)行液液萃取操作，耗時(shí)費(fèi)力，強(qiáng)酸處理也容易發(fā)生危險(xiǎn)，所以此方法并不理想。 方法 4 結(jié)合法 。 方法 2 繼續(xù)采用方法 1和方法 3，直至油脂完全除凈。 凝膠色譜分離法與濃硫酸法相結(jié)合除脂，先用凝膠色譜除去大量脂肪，接收液再加入濃硫酸去除剩余脂肪，回收率在 40%間，結(jié)果較為理想，但操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不便于大量處理樣品。 方法 5 自制酸化硅膠固相萃取柱凈化法 。 通過(guò)理論分析發(fā) 現(xiàn) 結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)活潑的酚羥基，屬于強(qiáng)極性物質(zhì)， 硅膠會(huì) 緊密 結(jié)合 ，若洗脫液的極性不足以將其洗脫下來(lái)，則目標(biāo)物 失很大。制作酸化硅膠時(shí)，酸化后的硅膠已被濃硫酸磺基化，將活潑的氫離子取代，使其喪失了強(qiáng)極性，因此酸化硅膠層不會(huì)與 生牢固的結(jié)合，而未酸化的硅膠層會(huì)強(qiáng)烈地吸附此對(duì)傳統(tǒng)的酸化硅膠柱 (共五層：從下往上依次為無(wú)水硫酸鈉層、硅膠層、酸化硅膠層、硅膠層和無(wú)水硫酸鈉 )進(jìn)行了大膽改進(jìn)，將酸化硅膠柱中的硅膠層去除，新型的酸化硅膠柱從下往上依次為： 2水硫酸鈉、 15g 44%酸化硅膠 (過(guò)量 )、 2水硫酸鈉。 試驗(yàn)結(jié)果證明，采用這個(gè)凈化方法， 取得了較為理想的絕對(duì)回收率 (50%；而且此方法簡(jiǎn)單快捷，油脂可以完全去除，能滿足后續(xù)液質(zhì)分析的需要 ，故采用自制酸化硅膠固相萃取柱進(jìn)行凈化處理 。 標(biāo)物流出體積的確定 手動(dòng)填充的酸化硅膠柱滿柱體積為 150 此設(shè)定 150 將目標(biāo)物100%洗脫下來(lái)。在將加標(biāo)的空白基質(zhì)上柱之后，每次加入 10 脫液，分 15次加入，編號(hào)為 1樣后測(cè)定 1濃縮液中目標(biāo)物的含量。發(fā)現(xiàn) 2 號(hào) 5 號(hào) 有極少量的目標(biāo)物流出，所以，流出體積確動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 10 定為 80 是為了確保目標(biāo)物完全流出，所以本試驗(yàn)將目標(biāo)物流出體積定為100 動(dòng)相 的選擇 根據(jù)相關(guān)資料，選擇了 18 柱（ 2.1 mm ×50 m）色譜柱。 由于電噴霧質(zhì)譜的電離是在溶液狀態(tài)電離，因此流動(dòng)相的組成和添加劑除了影響目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和峰形外，還明顯影響到目標(biāo)化合物的離子化效率。從而影響目標(biāo)化合物的檢測(cè)靈敏度。實(shí)驗(yàn)在滿足較好的色譜分離的同時(shí)，比較了甲醇 /乙腈 (V/V: 1/1)腈 種流動(dòng)相對(duì)目標(biāo)化合物離子化程度的影響。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相為甲醇 /乙腈 應(yīng)值明顯高于乙腈 約為 2～ 4 倍 )。因此，實(shí)驗(yàn)選用甲醇 /乙腈 (V/V: 1/1)行 80 除了考察了流動(dòng)相組成外，還比較了流動(dòng)相為甲醇 /乙腈 (V/V: 1/1)加入一定量的醋酸銨或氨水后，目標(biāo)化合物的響應(yīng)值均有所降低，因此，實(shí)驗(yàn)中采用甲醇 /乙腈 (V/V: 1/1) 譜條件的優(yōu)化 分析 要用到多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ 式。首先，利用流動(dòng)注射泵連續(xù)進(jìn)樣。在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描以選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負(fù)離子模式下，全掃描的分子離子 [M - H ]- m/z 理想。因此選用 [M 作碰撞誘導(dǎo)解離的母離子。二級(jí)質(zhì)譜圖中，觀察到m/z 中 m/z -， m/z -。 分析 ，同樣利用流動(dòng)注射泵連續(xù)進(jìn)樣。在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描以選擇適當(dāng)?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：在負(fù)離子模式下，同樣是全掃描的分子離子 [M - H ]- m/z 理想，但是對(duì)于二級(jí)質(zhì)譜，該化合物只能檢測(cè) 以用選擇離子（ 式即可。但是本著高效的原則，希望和四溴雙酚 A 同時(shí)檢測(cè)，所以選擇了 m/z m/z 為其子離子，與四溴雙酚 A 一起使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ 式。 在確定了母離子和子離子的基礎(chǔ)上，對(duì)毛細(xì)管電壓、錐孔電壓、離子源溫度、動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 11 脫溶劑溫 度等條件進(jìn)行了優(yōu)化 。 性范圍 以 500.0 ng/ 合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣， 根據(jù)待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比（ y）和對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的質(zhì)量（ x）進(jìn)行線性回歸，得出線性方程為： y = 關(guān)系數(shù)： αy = 關(guān)系數(shù)： βy = 關(guān)系數(shù)： γy = 關(guān)系數(shù)： 準(zhǔn)曲線 的相對(duì)響應(yīng)因子 計(jì)算線性曲線圖中每個(gè)點(diǎn)上的相對(duì)響應(yīng)因子 出平均相對(duì)響應(yīng)因子 (見(jiàn)表 1)，計(jì)算公式如下： ? 公式中： 表 1 合 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液相對(duì)響應(yīng)因子 f1 f2 f3 f4 f5 f 平均 - - 出限與定量限 檢測(cè)限根據(jù)對(duì)基質(zhì)空白的測(cè)定確定噪聲，以 3倍噪聲峰高對(duì)應(yīng)的濃度為檢測(cè)限 (計(jì)算公式如下： D ?? ??? 3動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 12 式中： 試驗(yàn) N 值為 1； 加入定量?jī)?nèi)標(biāo)的量； 而以 10倍噪聲峰高對(duì)應(yīng)的濃度為定量限 (計(jì)算公式如下： Q ?? ??? 10取 5經(jīng)檢測(cè)確定不含 作為不含目標(biāo)物的基質(zhì)樣，加入 20 同位素 內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 B 200μL)，按前述 機(jī)測(cè)定 (三組平行，取平均值 )。結(jié)果如表 2所示。 確定 βng/g， ng/g， ng/g(以脂肪計(jì) )；ng/g (以脂肪計(jì) )。 表 2 檢測(cè)限和定量限測(cè)定結(jié)果 (ng/g，以脂肪計(jì) ) α γ 出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限 檢出限 定量限 平行 1 行 2 行 3 值 收率與 精密度 采用市售的金龍魚(yú)植物油為空白基質(zhì)，在樣品中添加低、中、高三個(gè)不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行 析，每個(gè)添加水平平行測(cè)定 6 次?；厥章时硎痉椒ǖ目尚行?，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 (示方法的重現(xiàn)率即精密度，結(jié)果見(jiàn)表 3。結(jié)果顯示三種 平均回收率在 間， 圍為 間。表明該方法可行，且精密度良好。 表 3 回收率和精密度 加標(biāo) 水平 平均回收率 (%) n=6) α0物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 13 法的可行性 為了驗(yàn)證方法在實(shí)際樣品中的可行性，采用建立的方法，在魚(yú)類、肉類、蛋類、乳類這四種實(shí)際的空白樣品 (樣品經(jīng)測(cè)定不含目標(biāo)物 )中添加質(zhì)量濃度為 20 析，每個(gè)添加水平平行測(cè)定 6 次。以回收率表示方法的可行性，以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 (示方法的重現(xiàn)性即精密度，結(jié)果見(jiàn)表 4。 結(jié)果顯示三種 平均回收率在 間， 間，表明該方法可行，且精密度良好。 表 4 實(shí)際樣品中加標(biāo)回收 結(jié)果 實(shí)際樣品 平均回收率 (%) n=6) α類 類 類 類 際考核樣品 驗(yàn)證試驗(yàn) 采用所建立的方法，測(cè)定了從挪威 采購(gòu)的鱒魚(yú)肉 (品，并用此方法測(cè)得的樣品值與 2010年 挪威公共衛(wèi)生學(xué)院組織的食品中 出的均值進(jìn)行了比對(duì)。 樣品中 α， β， γ所示。 檢測(cè)結(jié)果 均以濕重計(jì)，結(jié)果如表 5所示。 采用本方法分析的 結(jié)果與國(guó)際不同試驗(yàn)室的均值相接近，說(shuō)明本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，該分析方法可行。但實(shí)測(cè)值均低于國(guó)際均值，其原因可能是：同時(shí)分析兩種物質(zhì)時(shí)，前處理方法的目標(biāo)物損失率較單獨(dú)分析 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 編制說(shuō)明 14 圖 3 挪威鱒魚(yú)樣品 中 構(gòu)體、 同位素內(nèi)標(biāo)的色譜圖 1- 132- 133- 134- 13 5- α 6- β 7- γ 表 5 本方法對(duì) 實(shí)測(cè)值與 2010 年國(guó)際比對(duì)考核中鱒魚(yú)樣品均值的比較 目標(biāo)物質(zhì) 本方法實(shí)測(cè)值 (pg/g) 國(guó)際均值 (pg/g) α5864 176 422 0 19014 192 440 0 4. 參考文獻(xiàn) [1] 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y = - y = y = 、 精密度和回收率 目標(biāo)物 添加濃度（ μg/用油 ） n=6,%） 平均 回收率（ %） α 20 - 20 γ- 20 20 、 實(shí)際樣品的測(cè)定 目標(biāo)物 樣品一（豬肉） 樣品二 （鯽魚(yú)肉） 樣品五 （草魚(yú)肉） 樣品六 （牛肉） 樣品三 （牛奶） 樣品四 （雞蛋） αD - D - D D D D 單位： ng/g 以脂肪計(jì) 有檢測(cè)出來(lái) 六、 檢出限 物質(zhì) pg/g,以脂肪計(jì) ) 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 α- - 物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 驗(yàn) 證 報(bào) 告 方法名 稱：動(dòng) 物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的測(cè)定 驗(yàn)證單位： 湖北省疾控中心 報(bào)告日期： 2013 年 11 月 20 日 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 方法名稱：動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 一、 樣品與樣品前處理 秤取冷凍干燥豬肉樣品 3濾膜放入索氏抽提裝置中，放入冷凍干燥豬肉樣品的同時(shí)加入 100 ng/33混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用溶液 B 200 μ時(shí)加入無(wú)水硫酸鈉適量。用 3001:1，體積比）提取 18流速度 控制在 4次～ 6次 /h。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮提取液至盡干， 放置過(guò)夜后 測(cè)定脂肪含量 。用 正己烷 復(fù)溶 ，再次濃縮至 2~3動(dòng)填充硅膠柱凈化：在固相萃取玻璃柱從下往上填入 2 5 g 44% 酸化硅膠， 2 洗耳球輕震使填料界面水平，加入正己烷排掉氣泡，加入 200 上述用 2~3入手動(dòng)填充硅膠柱中，并用正己烷反復(fù)洗燒瓶 3次。用 100 后用 100 氯甲烷體積比 1:1的混合液洗脫，收集所有洗脫液并旋轉(zhuǎn)至近干，每次用 3 此反復(fù) 3移至 10 氣吹干后加入200 μ渦振蕩后經(jīng) 二、分析條件 件： 18 柱（ 2.1 mm ×50 m） , 柱溫： 50℃ ；樣品池溫度： 10℃ ；進(jìn)樣體積： 5μL；流速： 0.3 mL/動(dòng)相： A 液為甲醇：乙腈混合液 (1： 1， v/v)， B 液為超純水， 80度洗脫。 質(zhì)譜參數(shù)： 離子源：電噴霧電離源，負(fù)電離模式 (-))。毛細(xì)管電壓： 孔電壓 : 0V， 70V。噴霧器壓力： 42溫度 : 120℃ ；脫溶劑溫度： 325℃ 。脫溶劑氣： 800L/h；反吹氣流量： 50L/h。碰撞氣：測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè) ( 133離子以及定量離子如表 1所示。 表 1 目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)譜定量參數(shù) 化合物 母離子 m/z 子離子 m/z 定量離子 m/z 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 33、工作曲線 以 500.0 ng/據(jù)待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的峰面積比（ y）和對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物的質(zhì)量（ x）進(jìn)行線性回歸， 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度為 50 ng/標(biāo)準(zhǔn)溶液系列建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。根據(jù)濃度與峰面積關(guān)系，得到 計(jì)算， α-、 β-、 γ滿足 檢測(cè) 要求。 四、精密度和回收率 以金龍魚(yú)植物油為空白基質(zhì)，抽提時(shí)加入 5 它按照以上試驗(yàn)方法處理，平行 5份，測(cè)定 5%間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 表 1 添加量（ 測(cè)定量 平均值（ 標(biāo)準(zhǔn)偏差 回收率 15 α 91 89 87 85、方法檢出限 按照分析步驟，連續(xù)測(cè)定 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算測(cè)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)差，按照 3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算得方法的檢出限。 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 αβγ.5 ng/方法對(duì) αβγng/g(以脂肪計(jì) )。 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 驗(yàn) 證 報(bào) 告 方法名稱： 動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 的測(cè)定 驗(yàn)證單位： 湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院 報(bào)告日期： 2013 年 11 月 21 日 動(dòng)物性 食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 A 含量的測(cè)定 驗(yàn)證報(bào)告 方法名稱： 動(dòng)物性食品中六溴環(huán)十二烷和四溴雙酚 一、 樣品及前處理 牛奶 50 移至培養(yǎng)皿中，于 冰箱中冷凍 4 h，轉(zhuǎn)移至冷凍干燥機(jī)中干燥 24 濾膜和 時(shí) 將 冷凍干燥后得到的牛奶固 體研碎并全部轉(zhuǎn)移至玻璃纖維套筒 中并 加入 13合內(nèi)標(biāo)溶液 B 200 μL，用正己烷和丙酮（ 1:1，體積比）提取 18轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至盡干，放置過(guò)夜后測(cè)定脂肪含量，用 4 手動(dòng)填充固相萃取柱：固相萃取玻璃柱底部塞一小撮棉花，從下往上依次倒入 2 15 g 44%酸化硅膠、 2 洗耳球輕震管壁以使填料表面水平，正己烷倒入管內(nèi)排除氣泡后用 100 正己烷復(fù)溶的樣品滴入手動(dòng)填充柱內(nèi)，并用正己烷反復(fù)清洗燒瓶 3次，先用 100 用 100 二氯甲烷混合溶液 (1:1， v/v)洗脫，收集洗脫液并旋蒸至近干，再用正己烷復(fù)溶，反復(fù) 3次正己烷清洗燒瓶轉(zhuǎn)移至 10 氣吹干后加入甲醇 200 μL，渦輪震蕩后果針頭有機(jī)濾膜（ m）， 二、分析條件 液相條件 色譜柱： 18 柱（ 2.1 mm ×50 m）；柱溫： 50℃ ；樣品池溫度： 10℃ ；進(jìn)樣體積： 5 μL；流動(dòng)相： A 液為甲醇 1： 1， v/v）， B 液為超純水，等度洗脫；流速： 0.3 mL/ 質(zhì)譜參數(shù) 離子源：電噴霧電離（ （ -））；檢測(cè)方式： 細(xì)管電壓： 孔電壓 :：六溴環(huán)十二烷為 80 V，四溴雙酚 A 為 170 V；噴霧器壓力： 42 溫度： 120℃ ；脫溶劑溫度： 350℃ ；脫溶劑氣： 800 L/h；反吹氣流量： 50 L/h；碰撞氣： 0.2 mL/溴環(huán)十二烷：母離子m/z 離子 m/z [79）、 m/z [81）； 13環(huán)十二烷：母離子 m/z 離子 m/z m/z 量離子：六溴環(huán)十二烷和動(dòng)物性 食品