《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中α-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》 編制說(shuō)明

《《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中α-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》 編制說(shuō)明》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中α-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》 編制說(shuō)明（18頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 《 植物源性食品中 α液相色譜 質(zhì)譜法 》 編 制 說(shuō) 明 （ 送審稿 ） 吉林省 農(nóng)業(yè)科學(xué)院 二〇 一 二 年 十 一 月 目 錄 一、 研究背景 ………………………………………………………… ………… 2 二、 任務(wù)來(lái)源 … ……………………………………………………… ………… 2 三、 制定 本 標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義 ……………………………………… ………… 2 四、 標(biāo)準(zhǔn)制定 的 主要 過(guò)程 ………………………………………… …………… 3 五、 制定標(biāo)準(zhǔn) 的原則和依據(jù) ………………………………………… ………… 4 六、 標(biāo)準(zhǔn)主要條款的說(shuō)明 …………………………………………… ………… 4 1、標(biāo)準(zhǔn)的名稱 … ……………………………………………………… ………… 4 2、標(biāo)準(zhǔn)的范圍 … ……………………………………………………… ………… 4 3、方法原理 … ……………………………………………………… …………… 5 4、前處理?xiàng)l件 … ……………………………………………………… …………… 5 5、儀器分析條件 … …………………………………………………… …………… 6 6、檢出限 … …………… ………………………………………… …………… 9 7、線性范圍 … …………………………………………………… ……………1 0 8、準(zhǔn)確度、精密度 … …………………………………………… …………… 11 七、 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證情況說(shuō)明 … …………………………………………… ……………1 3 八 、 驗(yàn)證結(jié)論 ………………………………………………………… ……………1 3 九、本標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性地方標(biāo)準(zhǔn)的建議 ………………………………… ………1 3 十、貫徹標(biāo)準(zhǔn)要求和措施建議 … ………………………………… ………………1 4 十一、參考文獻(xiàn) ………………… ………………………………… ……………1 4 1 一、 研究背景 玉米赤霉烯酮類毒素及其代謝產(chǎn)物具有雌激素類物質(zhì)的生物活性，食品中的該物質(zhì)通過(guò)食用逐漸在人體內(nèi)蓄積，造成人體性激素機(jī)能紊亂及影響第二性征的正常發(fā)育，在外部條件誘導(dǎo)下，可能致癌。尤其是對(duì)女?huà)氲奈：Ω鼮閲?yán)重，易造成性早熟。隨著研究的深入，人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到只進(jìn)行玉米赤霉烯酮是不夠的，同時(shí)對(duì)食品中 α能正確評(píng)價(jià)其污染程度及潛在風(fēng)險(xiǎn)。目前國(guó)內(nèi)各科研機(jī)構(gòu)正積極開(kāi)展農(nóng)產(chǎn)品安全生產(chǎn)、檢測(cè)、監(jiān)督管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的研究，其中食品中 玉米赤霉烯酮及其次生代謝物的測(cè)定是重要的研究?jī)?nèi)容之一。 二、 任務(wù)來(lái)源 任務(wù)來(lái)源：吉林省衛(wèi)生廳 任務(wù)編號(hào)： 32 - 2012 歸口單位：吉林省 農(nóng)業(yè)委員會(huì) 起草單位：吉林省 農(nóng)業(yè)科學(xué)院 三、 制定 本 標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義 玉米赤霉烯酮的檢測(cè)技術(shù)相對(duì)已經(jīng)成熟，其中高效液相色譜法使用最為廣泛，目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)使用的全部為高效液相色譜法，但是該方法有 一個(gè)弊端，就是定性能力較差，檢測(cè)中往往造成假陽(yáng)性，且靈敏度不高。而液相色譜 質(zhì)譜法則可很好的解決這兩個(gè)問(wèn)題。同時(shí)玉米赤霉醇是玉米赤霉烯酮的主要代謝產(chǎn)物，同樣具有類雌激素作 用，若玉米赤霉烯酮或玉米赤霉烯醇，兩個(gè)指標(biāo)中，有一項(xiàng)明顯偏高，則致病的幾率則大大增加。目前對(duì)玉米赤霉醇檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)僅有用于動(dòng)物源性食品檢測(cè)的，而植源性食品中沒(méi)有檢測(cè)方法。在此情況下，我們提出《植物源性食品中 α液相色譜 質(zhì)譜法》地方標(biāo)準(zhǔn)的制訂，是非常具有前瞻性及先進(jìn)性的，可以彌補(bǔ)監(jiān)管機(jī)構(gòu)和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)對(duì)植物源性食品中玉米赤霉醇檢測(cè)無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可依的現(xiàn)狀，使檢測(cè)方法統(tǒng)一化、規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化。 四、 標(biāo)準(zhǔn)制定的主要過(guò)程 1、 前期工作 （一）調(diào)查研究階段： 2012 年 1 月～ 2012 年 6 月 該標(biāo)準(zhǔn)立 項(xiàng)后，標(biāo)準(zhǔn)起草小組立即著手進(jìn)行有關(guān) α業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)查新工作，同時(shí)咨詢了國(guó)內(nèi)相關(guān)專家的意見(jiàn)和建議。在大量收集、整理和分析國(guó)內(nèi)外在該研究領(lǐng)域的有關(guān)技術(shù)資料，并按制定標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行分類整理的基礎(chǔ)上，明確了標(biāo)準(zhǔn)制定的技術(shù)路線。 （二）起草階段： 2012 年 7 月～ 2012 年 11 月 標(biāo)準(zhǔn)起草小組按照計(jì)劃任務(wù)書(shū)的要求，結(jié)合專家咨詢意見(jiàn)建議以及其它制定標(biāo)準(zhǔn)的要求，研究建立標(biāo)準(zhǔn)方法的實(shí)驗(yàn)方案，并進(jìn)行條件試驗(yàn)。 起草人員認(rèn)真查閱了標(biāo)準(zhǔn)制定的有關(guān)文件，通 過(guò)參加標(biāo)準(zhǔn)宣貫培訓(xùn)， 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的格式、內(nèi)容、術(shù)語(yǔ)表達(dá)方式等進(jìn)行了深入學(xué)習(xí)，嚴(yán)格遵循 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》和 準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則 第 4 部分 :化學(xué)分析方法》給出的規(guī)則起草了《植物源性食品中 α液相色譜 質(zhì)譜法》。起草小組成員對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的草案進(jìn)行了多次修改，形成了征求意見(jiàn)稿。 向吉林省食品藥品檢驗(yàn)所等 10 個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)發(fā)出了征求意見(jiàn)稿，有 6 個(gè)機(jī)構(gòu)提出了修改意見(jiàn)， 征求專家意見(jiàn)匯總處理表 見(jiàn)附件 1。 （三） 實(shí)驗(yàn)室間的 驗(yàn)證工作 ： 2012 年 11 月 2012 年 11 月， 我們選定了 吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院等 省內(nèi)三家權(quán)威的檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行了 實(shí)驗(yàn)室間的 比對(duì) 驗(yàn)證工作。通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)數(shù)據(jù)，驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確度和精密度、檢出限等。參加驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室一致認(rèn)為：該方法適用于測(cè)定 植物源性食品中 α含量，具有測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)。 驗(yàn)證 報(bào)告 見(jiàn)附件 2。 五、 制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù) 本標(biāo)準(zhǔn)編制遵循 “先進(jìn)性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性 ”的原則，盡可能與國(guó)際通行標(biāo)準(zhǔn)接軌，注重標(biāo)準(zhǔn)的可操作性，嚴(yán)格按照 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》和 準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則 第 4 部分：化學(xué)分析方法》的要求進(jìn)行編寫(xiě)。 六、 標(biāo)準(zhǔn)主要條款的說(shuō)明 1、 標(biāo)準(zhǔn)的名稱 植物源性食品中 α液相色譜 質(zhì)譜法 2、 標(biāo)準(zhǔn)的范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物源性食品中 α質(zhì)譜 /質(zhì)譜測(cè)定方法。適用于成品糧及其加工制品（面粉、淀粉等）、 食用植物油脂及其加工制品 等中 α 3、 方法原理 試料 中 α霉烯酮經(jīng)三氯甲烷提取，采用堿性水溶液 萃取并調(diào)至中性后，再經(jīng) 二氯甲烷萃取后，使用液相色譜 質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量 。 4、 前處理?xiàng)l件 取 稱取試料 10 g（精確至 g）于 100 塞錐形瓶中。 固體樣品 加入50 氯甲烷（ 植物油脂樣品加入 35 氯甲烷（ ， 蓋緊塞子，于振蕩提取器上（ 振蕩提取 30 化 使用中速濾紙過(guò)濾提取液（ 并用三氯甲烷定容至 50 1)。 吸取25.0 取液 ( 125 液漏斗（ ，加入 5 和氯化鈉溶液（ 混勻，再 加 入 25 %氫氧化鈉（ 液，劇烈振蕩 1 置分層，棄去三氯甲烷層。 再用 25 氯甲烷 重復(fù) 萃取一次，棄去三氯甲烷層。加入 25 檬酸溶液（ ， 混勻。 再 加入 25 氯甲烷（ 劇烈振蕩 1 置分層。 將 二氯甲烷層溶液通過(guò)裝有 5 g 無(wú)水硫酸鈉（ 漏斗。 再用 25 氯甲烷重復(fù)萃取一次，操作同上。 另用 5 氯甲烷沖洗無(wú)水硫酸鈉，合并二氯甲烷萃取液 至 濃縮瓶中， 40 ℃ 以下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干 。殘 留 物用 5 氯甲烷溶解并轉(zhuǎn)移至玻璃離心管中，于40 ℃ 以下用微弱氮?dú)獯蹈?，殘留物?1.0 腈 解， 于漩渦混合器上（ 漩渦混勻后，過(guò) 膜 （ ，供儀器測(cè)定 。 處理?xiàng)l件的確定 取溶劑的選擇 比較了三氯甲烷、乙腈、無(wú)水乙醚三種提取溶劑的提取效果 。其中三氯甲烷和乙醚提取效率較高，考慮到乙醚揮發(fā)性高，操作過(guò)程中不易控制，因此我們選擇了三氯甲烷作為提取溶劑。 取時(shí)間的選擇 比較了 10203060果發(fā)現(xiàn)隨著提取時(shí)間的增加，提取效率不斷提高， 30后不再增加，因此確定 30 α此選擇氫氧化鈉作為第一次萃取的溶液，以除去脂類和色素等脂溶性的雜質(zhì)。對(duì) 1%、 2%和 3%四種濃度的氫氧化鈉的萃取效率進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)氫氧化鈉的濃度為 2%時(shí)較為合適。 5 儀器參考條件 譜參考條件 a） 色譜柱： 譜柱， 100 .1 徑 m； b） 柱溫： 40 ℃ ； c） 流動(dòng)相、流速及洗脫梯度：流速 0.3 mL/脫梯度見(jiàn)表 1； d） 進(jìn)樣量： 30 μL。 表 1 流動(dòng)相、流速及洗脫梯度 時(shí)間 /速 /（ mL/ A 相：水 /% B 相：乙腈 /% 0 50 5 75 100 100 00 0 00 0 譜參考條件的確定 比較了甲醇和水、乙腈和水作為流動(dòng)相的洗脫效果，發(fā) 現(xiàn)兩者相當(dāng)。但是甲醇和水用作流動(dòng)相時(shí)系統(tǒng)壓力較高，因此選擇了乙腈和水系統(tǒng)作為流動(dòng)相。 對(duì)于 α用 50%乙腈等度系統(tǒng)和梯度洗脫時(shí)分離效果相當(dāng)，等度洗脫時(shí)分析時(shí)間較長(zhǎng)，同時(shí)梯度洗脫可有效除去極性較弱的雜質(zhì)，因此選擇了梯度洗脫的方式。 比較了 501005018色譜柱，發(fā)現(xiàn)100分析較短， 4此選擇了 100 .1 粒徑 m）的 a）電離方式：電噴霧電離； b）掃描方式：負(fù)離子掃描； c）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ d）離子源溫度： 350 ℃ ； e）干燥氣流量： 10 L/ f）監(jiān)測(cè)離子、去簇電壓及碰撞能量：見(jiàn)表 2。 表 2 α簇電壓及碰撞能量 化合物名稱 監(jiān)測(cè)離子 去簇電壓 碰撞能量 α319/275a； 319/160 15； 米赤霉烯酮 317/175a； 317/131 25； 譜參考條件的確定 對(duì)掃描方式、離子源溫度和干燥氣溫度等進(jìn)行了優(yōu)化，確定出最佳的質(zhì)譜條件。對(duì) α撞能量等進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)篩選出最佳的定性和定量離子對(duì)。 準(zhǔn)溶液、 玉米 空白樣品、 玉米加標(biāo) 樣品 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ 譜圖 按照確定的前處理方法和儀器參考條件對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)溶液、 玉米空白樣品、玉米 、大豆、淀粉、花生、小麥面粉、大米、芝麻油、玉米油及大豆油等樣品的空白 加標(biāo) 進(jìn)行 測(cè)定，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ 譜圖見(jiàn)圖 1～圖 11。 圖 1 0.5 ng/準(zhǔn)溶液 譜圖 圖 2 空白玉米樣品 譜圖 圖 3 空白玉米 樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 4 空白 大豆 樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 5 空白 淀粉樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 6 空白 花生樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 7 空白 小麥面粉樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 8 空白 大米樣品 加標(biāo) 譜圖 圖 9 空白 芝麻油樣品 加標(biāo) 圖 10 空白 玉米油樣品 加標(biāo) 圖 11 空白 大豆油樣品 加標(biāo) 6、 檢出限 和定量限 以信噪比為 3時(shí)計(jì)算方法的檢出限 。 以樣品取樣量為 10 g，確定 αmg/mg/信噪比為 10時(shí)計(jì)算方法的定量限限 。 以樣品取樣量為 10 g，確定 αmg/mg/、 線性范圍 配制了 ng/ng/ng/ng/10.0 ng/0.0 ng/50.0 ng/100 ng/不同濃度系列 α準(zhǔn)溶液上機(jī)測(cè)定 ， 結(jié)果發(fā)現(xiàn) ng/20.0 ng/性曲線見(jiàn)圖 6 和圖 7。 圖 6 α 圖 7 玉米赤霉烯酮線性曲線圖 8、 回收率、 準(zhǔn)確度 和 精密度 在 玉米、大豆、水稻、花生、 玉米 淀粉、面粉、大豆油、玉米色拉油、芝麻油等 空白 樣品 中 加入 α玉米赤霉烯酮 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) ， 進(jìn)行 回收率 與精密度實(shí)驗(yàn) 。 實(shí)驗(yàn) 室內(nèi)回收率及 重復(fù)性 測(cè)定 結(jié)果見(jiàn)表 3，實(shí)驗(yàn)室間回收率及 再現(xiàn)性 測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 4。 表 3 不同基質(zhì)空白樣品中 α n=6） 樣品名稱 被測(cè)組分 添加濃度 /(μg/回收率范圍 /% 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 /% 玉米 α米赤霉烯酮 豆 α米赤霉烯酮 稻 α米赤霉烯酮 生 α米赤霉烯酮 米淀粉 α米赤霉烯酮 粉 α米赤霉烯酮 豆油 α米赤霉烯酮 米色拉油 α米赤霉烯酮 麻油 α米赤霉烯酮 3 不同基質(zhì)空白樣品中 α和玉米赤霉烯酮添加回收率及精密度（ n=6） 樣品 項(xiàng)目 添加水平 /(μg/平均測(cè)定回收率 /% 平均值 /% 吉林省 質(zhì)檢院 吉林商檢 長(zhǎng)春市 質(zhì)檢院 本所 玉米 α赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 大豆 α赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 大米 α赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 玉米油 α赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 七、 方法驗(yàn)證 本方法經(jīng) 吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院、吉 林出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心、長(zhǎng)春市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院等 三個(gè)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員進(jìn)行了方法驗(yàn)證試驗(yàn) 。 八、 驗(yàn)證結(jié)論 經(jīng)驗(yàn)證該檢測(cè)方法在精密度、準(zhǔn)確度、檢出限等方面完全達(dá)到了測(cè)定 植物源性食品中 α測(cè)要求，其方法方便、快捷，應(yīng)推廣應(yīng)用。 九、本標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性地方標(biāo)準(zhǔn)的建議 通過(guò)以上一系列的實(shí)驗(yàn)研究，建立了 植物源性食品中 α測(cè)方法。該方法準(zhǔn)確可靠。 建議把 《植物源性食品中α液相色譜 質(zhì)譜法》 作為強(qiáng)制性地方標(biāo)準(zhǔn)批準(zhǔn)發(fā)布。 十、 貫徹標(biāo) 準(zhǔn)要求和措施建議 1、技術(shù)措施 要求熟練掌握前處理技術(shù)，了解儀器性能、原理，且能熟練操作，能對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。 2、管理措施 本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)施過(guò)程，嚴(yán)格執(zhí)行檢驗(yàn)規(guī)范，熟悉檢驗(yàn)方法和有關(guān)的法規(guī)，做到科學(xué)、公正、準(zhǔn)確、不受其他因素干擾，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。 3、實(shí)施方案 標(biāo)準(zhǔn)由吉林省衛(wèi)生廳發(fā)布，計(jì)劃于 發(fā)布實(shí)施，由 政主管部門(mén)負(fù)責(zé)監(jiān)督實(shí)施。 標(biāo)準(zhǔn)被批準(zhǔn)后，組織力量，進(jìn)行宣貫實(shí)施，通過(guò)該標(biāo)準(zhǔn)的貫徹實(shí)施，確保食品安全和保障人體健康等方面將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì) 效益。 十一、 參考文獻(xiàn) [1] 物中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 . [2] T 21982物源食品中玉米赤霉醇、 βαβ米赤霉酮和玉米赤霉烯酮?dú)埩袅繖z測(cè)方法 液相色譜 質(zhì)譜法 . [3] 23504品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法 . [4] 22963豚魚(yú)、鰻魚(yú)和烤鰻中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、乙烯雌酚、已烷雌酚、雙烯雌酚殘留量的測(cè)定 液相色 譜 [5] 1745出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的檢驗(yàn)方法 . [6]1772出口糧谷中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 免疫親和柱 [7]5792： 2009 of in [8]in 988. [9]孟娟、張晶、張楠等 超高效液相色譜 色譜， 2010,28（ 6）： 601