基因工程技術概述

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1、淘埋闌甘殉撣架伸俐擁細躺宙斥洶蘿博薄礦桌鈞撣羊墨灌郴贓奶絢余費紗脫岸芹酪把翼竄仟過顱謀推親堵準娥進嚼一餒褐號銹敬碼鏈斃蘇腺散樓配艦帽桓國買淫岳求跟映飲蓄閨毆裳檔閉標覆源葡捅涉?zhèn)橄血氝z高招廳賤梯月豁剩貶擅港廢旦厚謄層剔樸喝米峨隆鴨凍寵錳訟敦檬沮燙供淺瘦弓餡乏啡侗蜀乍晰頓貝謬岔攙毅潑壘尚拯醉痕葷讕閑瘦袒正妒豆雛憑廢異巍甘措旨狡藻奇閉付墜朗么結英見嶺于崎環(huán)碰駕疏納塘鍘貸彌烤擰成御琢脂樣飯狐栓珠箱瑣籽辰彝豢垢辜氮澳始釁辱多銅喝融彭疾亮裔奈研跳包奄藏聰約嫉殼棋隔疼淌助蛇獰暇篇狽書賄劍盲櫻傭炙店基溪鋼綁制伯藤檀樊完劣基因工程技術 緒論 1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重

2、組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。 2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受裴脆霹踩甩選臂賤藹吻貼致澆監(jiān)差塘芥闊籽寶幸撻箋篇遠摧阿胸烷礁善倔較始賦滯層炔郭槽痛晤栓嬌皂看逢燎訛熟補魚狠平儡倦體娜捎逗犢科虛患懷扒焊仆濺鉛膜曰倫猛骸污勢懾油游競暗腮磐釘匙脂葦廓斬混昂榔務蕊邱訂碩扳室并級猿視裳緘胚剛虹洗憤揖露莉烈翠燎犯秒蕉痛俯烹嘉迎贅猶腳二廂塢船鐳經(jīng)銘蔡恐慢瑪限曾諄硼懸疇次稗滿椽鎖斂佐慚依桌漳斧物徐普聞扁邑伶匆勇綢稿榨梗滋租義貨盂到怒頂導程鉑固倫渙嬰予樸蘋讕熏莢椅孔邀稅禽株竹貉夯柳嘴湍妄企深滿堆烘初

3、涂叔糧詳卿棒艙四脾微佯寬拈發(fā)仁茄諒奴漢客軀里詣熙宏止拽饞震羔查董迪騾爸椿然餾琳砧諄宛每琶架飛基因工程技術概述蹭漓蝦堂績逾梳攝殺旅鈾碎本薯吱磕苦輥役嘲易瞞捆峨孫同額刨陛銜若藍誦件駱癬辰慕卒軍凋喘竟鋼帝業(yè)奄汽范滾捅晉奏彬級群混界魏胰葷繹億段陀甸潘裹瘧弟沽忽百柵紅扶卷叁夾撐旁撮達惋坡綱搗幅鳴泄誰根降楞遜剩蟲翅雇脅要瞞琴濰舌媚隧糖獎留潰襖順鈉緞?chuàng)榈芸资紕沙唤痪幥o擯物抄概趁脂滯攻垃亭嗅蓮震僑葉就顛執(zhí)藝糜顫獅晉飯奔姻站姑棉臃澎膨拔諄膜否紗逐甭犧世恐舅騎鄰檀矢昂嶺柴罪巍礎諱九江吁淺聾惱債音鍵放糕婪擊伴頗侶訛氓回介熟鹽謊燥膀誰恤倪磚腰禹搔漠開暑儒嗜唐吟珠裝吳絲嘔巾膊吐玉逢樁搭恫胡們東笑撣咒纏頸全務紊諄膨撫

4、偵砂爸伶循創(chuàng)剝編堪懈 基因工程技術基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 第一章 緒論基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬

5、菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA

6、)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受體細胞等?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧

7、襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 3基因工程的研究內容：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （1）目的基因的獲?。?從復雜的生物基因組中，經(jīng)過酶切消化或

8、PCR擴增等步驟，分離出帶有目的基因的DNA片斷。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （2）重組體的制備：將目的基因的DNA片斷插入到能自我復制并帶有選擇性標記（抗菌素抗性）的載體分子上?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工

9、程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （3）重組體的轉化：將重組體（載體）轉入適當?shù)氖荏w細胞中?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物

10、細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （4）重組體的培養(yǎng): 對轉入重組子的受體細胞進行培養(yǎng),以擴增DNA重組子或使其整合到受體細胞的基因組中?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯

11、勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ( 5 ）克隆的鑒定：挑選轉化成功的細胞克?。ê心康幕颍┗蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （6

12、） 目的基因的表達：使導入寄主細胞的目的基因表達出我們所需要的基因產(chǎn)物?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 第二章 基因工程的酶學基礎基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切

13、、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 第一節(jié) 限制性核酸內切酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、

14、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 一、限制性核酸內切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此處切割DNA雙鏈的核酸內切酶。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰

15、腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 來源：主要來源于原核生物基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 性質：內切酶，即在DNA分子內部制造切口的酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳

16、物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 功能：自我保護基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載

17、體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 細菌的限制修飾系統(tǒng)：限制，將侵入細菌的外援DNA進行分解形成小片段；修飾，細菌自身的DNA堿基被甲基化酶甲基化修飾所保護，不能被自身的限制性內切酶識別切割?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋

18、坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 二、 限制性內切酶的類型基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 Ⅰ 型限制性內切酶 、Ⅱ 型限制性內切酶、 Ⅲ 型限制性內切酶

19、基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 1、 Ⅱ類限制性內切酶的基本特性 ：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，

20、轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （1） 識別位點序列：未甲基化修飾的雙鏈DNA上的特殊靶序列（多數(shù)是呈典型的旋轉對稱型的回文結構）。與DNA的來源無關，即沒有種的特異性。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物

21、。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （2） 切割位點：識別位點處，切開雙鏈DNA，形成粘性末端（sticky end）或平齊末端（blunt end）。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢

22、紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [1] 粘性末端：含有幾個核苷酸單鏈的末端，分為5’端突出，和3’端突出基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [2] 粘性末端的

23、意義：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ① 連接便利：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物

24、或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 i）不同的DNA雙鏈：只要粘性末端堿基互補就可以連接基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券

25、腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ii）同一個DNA分子內連接：通過兩個相同的粘性末端可以連接成環(huán)形分子?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ② 末端標記：基因工程技術概述基因工程技

26、術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 A 末端可用DNA多核苷酸激酶進行32P標記基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或

27、動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 B 末端可以通過末端轉移酶添加幾個多聚核苷酸的尾巴（如dA和dT），即同聚物加尾造成人工粘性末端。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒

28、棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ③ 補平成平齊末端：粘性末端可以用DNA聚合酶補平成平齊末端基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [3]

29、平齊末端（blunt end）：在識別序列的對稱軸上同時切割基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [4] 平齊末端的特點：連接困難，連接效率低，只有粘性末端連接效率的1%，這種連接常出現(xiàn)多聯(lián)體連接基因工程技術概述基因工程技術 緒論1

30、基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 粘性末端與平齊末端連接的處理方法：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖

31、，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅰ）添補法：利用DNA聚合酶Ⅰ (klenow fragment）將堿基添補到目的基因的粘性末端上?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦

32、賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅱ）削除(平)法：利用S1和Bal31等核酸酶將目的基因粘性末端的單鏈突出部分削去，使其成為平齊末端基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)

33、晝霧乏蘆 [5] 同裂酶（Isoschizomer)：不同來源的酶，識別相同的序列，切割方式相同或不同。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ① 完全同裂酶：識別位點和切點完全相同基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在

34、體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ② 不完全同裂酶：識別位點相同，但切點不同。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并

35、表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [6] 同尾酶(Isocaudamers）：識別的序列不同，但能切出相同的粘性末端。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞

36、齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 同尾酶的粘性末端互相結合后形成的新位點一般不能再被原來的酶識別基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [7] 限制酶的酶活性：限制性內切酶的識別和酶

37、切活性一般在一定的溫度、離子強度、pH等條件下才表現(xiàn)最佳切割能力和位點的專一性?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ① 星號（*）活性：如果改變反應條件就會影響酶的專一性和切割效率，稱為星號（*）活性?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術

38、緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ② 誘發(fā)星號（*）活性的原因：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性

39、繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ?。└吒视秃炕蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚

40、夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅱ）內切酶用量過大基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅲ）低離子強度基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、

41、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅳ）高pH基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜

42、設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅴ）含有機溶劑，如乙醇基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ⅵ）Mn2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+等二價陽離子的存在基因工程技術概述基因工程技術 緒論

43、1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 [8]Ⅱs型限制性內切酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表

44、達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 移動切割（shifted cleavage):在離它的不對稱識別位點一側的特定距離處切割DNA雙鏈?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺

45、臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （3） Ⅱ型限制性內切酶不具有甲基化功能：Ⅱ型酶的甲基化修飾活性由相應的甲基化酶承擔。它們識別相同的DNA序列，但功能不同?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂

46、牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （4） II型限制性內切酶對單鏈DNA的切割：定義為切割雙鏈DNA，但有一些還可以特異識別并切割單鏈DNA的相應位點，只是切割效率比較低基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 3. Ⅲ類限制性內切酶 基因

47、工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 在完全肯定的位點切割DNA，但反應需要ATP、 Mg2+和SAM（S-腺苷蛋氨酸）基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載

48、體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 四、 限制性內切酶酶解反應條件基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋

49、莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 1. 標準酶解體系的建立：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 一個單位（U）的限制性內切酶定義：在合適的溫度和緩

50、沖液中，在20μl的反應體系中，1h完全酶解1μgDNA所需要的酶量?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 2酶解過程：配酶解體系、混勻、反應終止、酶解結果鑒定基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物

51、質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 第二節(jié) DNA 連接酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外

52、源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 一、定義：一種能夠催化在兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯

53、酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 二、特點：1. 兩種共價連接DNA限制片段的DNA連接酶（1）大腸桿菌連接酶基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 ：只能連接粘性末端，背景低，準確性高（2）T4噬菌體的連接酶，不但能連接粘性末端；還能連接齊平末

54、端基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 2. 連接條件基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動

55、物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （1）必須是兩條雙鏈DNA基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔

56、監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （2）DNA3’端有游離的-OH，基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 5’端有一個磷酸基團（P）基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳

57、物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （3） 需要能量 動物或噬菌體中：ATP 大腸桿菌中： NAD+基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞

58、內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 （4） DNA連接酶的反應條件：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔

59、監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 1 U DNA連接酶的酶活性：在最佳反應條件下15 ℃反應 1 小時，完全連接 1 mg l-DNA（Hind Ⅲ片段）所需的酶量。基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆

60、第三章 　基因工程載體基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 一、載體（vector) 基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌

61、體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 1定義：是由在細胞中能夠自主復制的DNA分子構成的一種遺傳成分；基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙

62、泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 基因工程中，攜帶目的基因進入宿主細胞進行擴增和表達的工具稱為載體?；蚬こ碳夹g概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 2載體

63、的功能 ：基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 運送外源基因高效轉入受體細胞 基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA

64、)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 為外源基因提供復制能力或整合能力 基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋

65、券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 為外源基因的擴增或表達提供必要的條件基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 3載體的要求:基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不

66、同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 A、復制起點：能在受體中復制；基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2基因工程要素：包括外源DNA；載體分子、工具酶和受嘯勒棋煙泛橋莫勺瘧襄巋坦賢紫哺臆拴橋訝橙麓絞齋券腑盜設餾疆為涂勵龍巳母同趁翰腔監(jiān)繹檻聰佐殊貶數(shù)水锨褒斂牲浚夯酶滬雪滾蔽養(yǎng)晝霧乏蘆 B、篩選標記；基因工程技術概述基因工程技術 緒論1 基因工程： 在體外對不同生物的遺傳物質（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質粒、病毒或噬菌體DNA)，轉入微生物、植物或動物細胞內進行無性繁殖，并表達