高中生物 專(zhuān)題二課題一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件 新人教版必修1

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1、第一節(jié)第一節(jié)第一課時(shí)第一課時(shí)微生物微生物包括哪五類(lèi)包括哪五類(lèi)：真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物特點(diǎn)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,多數(shù)個(gè)體十分微小多數(shù)個(gè)體十分微小(o.1mm)的生物的總稱(chēng)。的生物的總稱(chēng)。 通常要用光學(xué)顯微鏡通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. 原核原核 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界真核真核病毒病毒 SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）蛋白質(zhì)病毒）真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電

2、子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平板劃線(xiàn)法平板劃線(xiàn)法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無(wú)菌技術(shù)的操作。無(wú)菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：（2）按培養(yǎng)基）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：的物理形態(tài)分： 液體培養(yǎng)基液體培

3、養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一一 基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí):（3）按培養(yǎng)基的）按培養(yǎng)基的功能分：功能分： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基的）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：化學(xué)成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半半合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基閱讀課本分別說(shuō)出閱讀課本分別說(shuō)出它們的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)。它們的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)。培養(yǎng)基的種類(lèi)液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基據(jù)物理性質(zhì)分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基據(jù)化學(xué)成分分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基據(jù)用途分常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于觀(guān)察微生物的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種用于微生物的分離、計(jì)數(shù)常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于分類(lèi)、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化

4、學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。例如，在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細(xì)菌、放線(xiàn)菌的生長(zhǎng)，從而分離到酵母菌和霉菌。又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可以抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同種類(lèi)的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可以用來(lái)鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基

5、加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基核苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類(lèi)和根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分

6、是氨基酸、合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定對(duì)固定; ;成本低成本低 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿(mǎn)缺少某些成分，不能完全滿(mǎn)足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：來(lái)源受限來(lái)源受限; ;成分復(fù)雜，影響對(duì)某成分復(fù)雜，影響對(duì)

7、某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：菌落固體培養(yǎng)基：菌落液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力 有動(dòng)力有動(dòng)力( (彌散彌散) )( (是否運(yùn)動(dòng)是否運(yùn)動(dòng)) ) 培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則： 目的要明確：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類(lèi)、培養(yǎng)的根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類(lèi)、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類(lèi)型和配制量。目的等確定培養(yǎng)基的類(lèi)型和配制量。 營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)

8、物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比比例要適宜。例如：碳氮比4 1時(shí)，谷氨酸棒狀時(shí)，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3 1時(shí)，時(shí)，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 pH要適宜要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。培養(yǎng)基呈酸性。 細(xì)菌細(xì)菌pH為為：6.5-7.5； 放線(xiàn)菌放線(xiàn)菌pH為：為：7.5-8.5； 真菌真菌pH為：為：5.0-6.0微生物的五種營(yíng)養(yǎng)要素微生物的五種營(yíng)養(yǎng)要素碳源氮源（nitrogen source） 生長(zhǎng)因子 微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)叫

9、生微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)叫生長(zhǎng)因子。長(zhǎng)因子。維生素維生素 氨基酸氨基酸 堿堿 基基 無(wú)機(jī)鹽（mineral salts） 水（wahtor） Cncnc-micro 凡能為微生物提供生長(zhǎng)繁殖所需碳元凡能為微生物提供生長(zhǎng)繁殖所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱(chēng)為碳源素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱(chēng)為碳源 。 凡是能為微生物提供所需氮元素的營(yíng)養(yǎng)凡是能為微生物提供所需氮元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都稱(chēng)為氮源。物質(zhì)都稱(chēng)為氮源。無(wú)機(jī)無(wú)機(jī)C源：源：CO2、碳酸鹽，只能被自養(yǎng)微生物利用、碳酸鹽，只能被自養(yǎng)微生物利用有機(jī)有機(jī)C源：各種糖類(lèi)，其次是有機(jī)酸、醇類(lèi)、源：各種糖類(lèi)，其次是有機(jī)酸、醇類(lèi)、 脂類(lèi)和烴脂類(lèi)和烴類(lèi)化合物類(lèi)化合物 碳源種類(lèi)Cn

10、cnc-micro分子態(tài)氮：固氮微生物以分子氮為唯一氮源分子態(tài)氮：固氮微生物以分子氮為唯一氮源 無(wú)機(jī)態(tài)氮：無(wú)機(jī)態(tài)氮：硝酸鹽、銨鹽硝酸鹽、銨鹽幾乎所有微生物能利用幾乎所有微生物能利用 有機(jī)態(tài)氮：有機(jī)態(tài)氮：蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物蛋白質(zhì)及其降解產(chǎn)物 a實(shí)驗(yàn)室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源實(shí)驗(yàn)室常用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏做氮源 b生產(chǎn)用玉米漿、豆餅、葵花餅、花生餅等生產(chǎn)用玉米漿、豆餅、葵花餅、花生餅等氮源種類(lèi)氮源種類(lèi)Cncnc-micro 構(gòu)成微生物細(xì)胞的組成成分構(gòu)成微生物細(xì)胞的組成成分 調(diào)解微生物細(xì)胞的滲透壓，調(diào)解微生物細(xì)胞的滲透壓， PH值和氧化還原電值和氧化還原電 位位 有些無(wú)機(jī)鹽如有些無(wú)機(jī)鹽如S

11、、Fe還可做為自養(yǎng)微生物的能源還可做為自養(yǎng)微生物的能源 構(gòu)成酶活性基的組成成分，維持酶活性。構(gòu)成酶活性基的組成成分，維持酶活性。Mg、Ca、K是多種酶的激活劑是多種酶的激活劑 無(wú)機(jī)鹽（無(wú)機(jī)鹽（mineral saltsmineral salts） 無(wú)機(jī)鹽功能無(wú)機(jī)鹽功能Cncnc-micro 構(gòu)成微生物細(xì)胞以構(gòu)成微生物細(xì)胞以C、H、O、N、P、S六六種元素為主，約占細(xì)胞干重的種元素為主，約占細(xì)胞干重的95以上；以上； Ca、K 、Mg、Fe為大量元素，以無(wú)機(jī)鹽為大量元素，以無(wú)機(jī)鹽陽(yáng)離子形式被吸收，配培養(yǎng)基要加陽(yáng)離子形式被吸收，配培養(yǎng)基要加磷酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽。硫酸鹽。 Zn、Ca、Mn、Co、

12、Mo等微量元素，在等微量元素，在微生物培養(yǎng)中有微生物培養(yǎng)中有0.1PPM就可以了，自來(lái)水就可以了，自來(lái)水原料中已夠用，不需另加。原料中已夠用，不需另加。無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)Cncnc-micro碳源、氮源、生長(zhǎng)因子的比較來(lái) 源常用原料功 能碳源CO2、NaHCO3、糖類(lèi)、脂肪酸、花生粉餅、石油等糖類(lèi)構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些還是異養(yǎng)做生物的主要能源物質(zhì)氮源N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏和蛋白胨等銨鹽、硝酸鹽等合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)因子維生素、氨基酸、堿基酶、核酸等的組成成分 各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？ 答：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有答：不管

13、哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 注注： 另外還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)另外還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如例如:生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 二二 無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌技術(shù)：無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。操作中，所有防止雜菌污染的方法。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒

14、法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線(xiàn)消毒、紫外線(xiàn)消毒(1)常用消毒的方法：常用消毒的方法：1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌: :2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下

15、維持下維持15-30min.15-30min.(2)常用滅菌的方法：常用滅菌的方法：分類(lèi)分類(lèi)定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學(xué)法：醛類(lèi)、烷化劑化學(xué)法：醛類(lèi)、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線(xiàn)、含氯劑、臭氧、紫外線(xiàn)、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類(lèi)、醇類(lèi)、酚超聲波、碘類(lèi)、醇類(lèi)、酚類(lèi)類(lèi)低效消低效消毒法毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類(lèi)、中單鏈季胺鹽、雙胍類(lèi)、中

16、草藥、金屬離子草藥、金屬離子常常識(shí)識(shí) 1 無(wú)菌技術(shù)包括：無(wú)菌技術(shù)包括： （1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 清潔和消毒清潔和消毒 ； （2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅菌滅菌 ； （3）為避免周?chē)⑸镂廴?，?shí)驗(yàn)操作應(yīng)在）為避免周?chē)⑸镂廴?，?shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 酒精燈火焰附近酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行；旁進(jìn)行； （4）避免已滅菌處理的材料用具與）避免已滅菌處理的材料用具與 周?chē)锲分車(chē)锲?相接觸。相接觸。 2 消毒方法：消毒方法： （1）日常生活經(jīng)常用到的是）日常生活經(jīng)常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消

17、毒法； （2）對(duì)一些不耐高溫的液體，則使用）對(duì)一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏巴氏 消毒法（作簡(jiǎn)要介紹）；消毒法（作簡(jiǎn)要介紹）； （3）對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑）對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)首先噴灑 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用 紫外線(xiàn)紫外線(xiàn) 進(jìn)行物理消毒。進(jìn)行物理消毒。 （4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用 酒精酒精 進(jìn)行消毒；進(jìn)行消毒； （5）飲水水源用）飲水水源用 氯氣氯氣 進(jìn)行消毒。進(jìn)行消毒。 3滅菌方法：滅菌方法： （1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用）接種環(huán)、接種針、試管口等使用 灼燒灼燒 滅菌法；

18、滅菌法； （2）玻璃器皿、金屬用具等使用）玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱干熱 滅菌法，所用器械是滅菌法，所用器械是 干熱滅干熱滅菌箱菌箱 ； （3）培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用）培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用 高壓蒸汽高壓蒸汽 滅菌法滅菌法，所用器械是，所用器械是 高壓蒸高壓蒸汽滅菌鍋汽滅菌鍋 。 （4）表面滅菌和空氣滅菌等使用）表面滅菌和空氣滅菌等使用 紫外線(xiàn)紫外線(xiàn) 滅菌法，所用器械是滅菌法，所用器械是 紫外紫外燈燈 。1.1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消

19、毒或滅請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種

20、6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1)1)配制：計(jì)算、稱(chēng)量配制：計(jì)算、稱(chēng)量、熔、熔化化2)2)調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH：用：用3%3%的的HCI/NaOHHCI/NaOH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié) pH 7pH 70- 723)3)分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾 在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。的一半為宜。4)4)包扎

21、：包扎：操作步驟操作步驟: 5) 5)滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣高壓蒸氣滅菌滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、溫度為121121，滅菌，滅菌151530min30min。 將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)，箱內(nèi)，在在160160170 170 下滅菌下滅菌2h2h。 6)6)倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基待培養(yǎng)基冷卻到冷卻到50 50 左右時(shí)，在酒精燈附左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。近倒平板。2

22、d2d后觀(guān)察平板，無(wú)雜菌污染才可用后觀(guān)察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種來(lái)接種. . 7) 7)無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培養(yǎng)的溫室中培養(yǎng)24244848小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。倒平板倒平板: 1) 1)、臨時(shí)保藏：、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2)2)、長(zhǎng)期保存：、長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法1).1).培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時(shí)，左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的才能用來(lái)倒平

23、板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2).2).為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。注意注意:3).3).平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4).4).在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這

24、個(gè)平板還能用濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。

25、2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌: :接種方法有：接種方法有：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法 平板劃線(xiàn)法平板劃線(xiàn)法: :通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線(xiàn)的操作基表面連續(xù)畫(huà)線(xiàn)的操作, ,將聚集的菌鐘逐步稀將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫(huà)線(xiàn)后在數(shù)次畫(huà)線(xiàn)后, ,可以分離到由可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體, ,這就是這就是菌落菌落. .菌落： 單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可

26、見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 霉菌的菌落霉菌的菌落特征特征因種而異因種而異菌落劃線(xiàn)后劃線(xiàn)后 培養(yǎng)一段時(shí)間后培養(yǎng)一段時(shí)間后 1).1).為什么在操作的第一步以及每次劃線(xiàn)之為什么在操作的第一步以及每次劃線(xiàn)之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍然前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的

27、微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線(xiàn)種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線(xiàn)前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，從而通過(guò)劃線(xiàn)菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，從而通過(guò)劃線(xiàn)次數(shù)的增加，使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)以便得到菌落。劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。

28、 2).2).在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線(xiàn)？冷卻后再進(jìn)行劃線(xiàn)？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3).3).在作第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，在作第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？ 答：劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)答：劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)逐步減少，

29、最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。的菌落。四、課題成果評(píng)價(jià)四、課題成果評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無(wú)后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無(wú)菌要求（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上

30、出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀(guān)察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀(guān)察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀(guān)察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀(guān)察顯不同，及時(shí)觀(guān)察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀(guān)察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。本

31、課題知識(shí)小結(jié)本課題知識(shí)小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是: :A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽 D.D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量無(wú)機(jī)氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；

32、有的碳源可不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如同時(shí)是氮源，如NHNH4 4HCOHCO3 3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于C C選選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類(lèi)繁多，功能也多樣。如二氧化碳，項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類(lèi)繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCONaHCO3 3，可作為自養(yǎng)型微，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而NaClNaCl則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于則只能提供無(wú)機(jī)鹽

33、。對(duì)于DD選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NHNH3 3可為硝可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源?；?xì)菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是: :A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前答案：答案：B 解析：解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A A說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌

34、種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；所以是正確的；B B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。全部微生物。C C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專(zhuān)門(mén)接和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專(zhuān)門(mén)接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。所接

35、菌種也殺死。編號(hào)編號(hào)成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類(lèi)型是養(yǎng)的微生物類(lèi)型是 （2 2）若不慎將過(guò)量）若不慎將過(guò)量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加

36、入可再加入 . .用于培養(yǎng)用于培養(yǎng) 金黃色葡萄金黃色葡萄球菌球菌. 自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機(jī)物含碳有機(jī)物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CHCH2 2OO），），該培養(yǎng)基可用于培該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)養(yǎng) 。（4 4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有 類(lèi)。類(lèi)。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的溶化后分裝前，要進(jìn)行的是是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是該增加的成分是 。固氮微生物固氮微生物 3

37、 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長(zhǎng)需要確定依微生物的生長(zhǎng)需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑） 解析解析： 對(duì)于一個(gè)培養(yǎng)基，它能培養(yǎng)何種微生物，對(duì)于一個(gè)培養(yǎng)基，它能培養(yǎng)何種微生物，要看它的化學(xué)成分。當(dāng)然這只適用于合成培養(yǎng)基，要看它的化學(xué)成分。當(dāng)然這只適用于合成培養(yǎng)基，如果是一個(gè)天然培養(yǎng)基就不能從培養(yǎng)基的成分上如果是一個(gè)天然培養(yǎng)基就不能從培養(yǎng)基的成分上區(qū)分它是培養(yǎng)何種微生物的。分析化學(xué)成分要從區(qū)分它是培養(yǎng)何種微生物的。分析化學(xué)成分要從營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的類(lèi)型出發(fā)。右表中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的類(lèi)型出發(fā)。右表中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有水、無(wú)機(jī)鹽、氮源三類(lèi)，缺乏碳源和特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。無(wú)機(jī)鹽、氮源三類(lèi)，缺乏碳源和特殊營(yíng)

38、養(yǎng)物質(zhì)。對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有的微生物是不需要的，但沒(méi)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有的微生物是不需要的，但沒(méi)有微生物是不需要碳源的。該培養(yǎng)基中沒(méi)有碳源，有微生物是不需要碳源的。該培養(yǎng)基中沒(méi)有碳源，說(shuō)明培養(yǎng)的微生物是從空氣中獲得碳源的，即可說(shuō)明培養(yǎng)的微生物是從空氣中獲得碳源的，即可培養(yǎng)的微生物就是自養(yǎng)型微生物了。該培養(yǎng)基中培養(yǎng)的微生物就是自養(yǎng)型微生物了。該培養(yǎng)基中加入了過(guò)量食鹽，就可以成為金黃色葡萄球菌鑒加入了過(guò)量食鹽，就可以成為金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基，但金黃色葡萄球菌是異養(yǎng)型微生物，別培養(yǎng)基，但金黃色葡萄球菌是異養(yǎng)型微生物，這個(gè)培養(yǎng)基就還需要加入有機(jī)碳源。該培養(yǎng)基若這個(gè)培養(yǎng)基就還需要加入有機(jī)碳源。該培養(yǎng)基若加入（加入（CH2O），培養(yǎng)基中就有了碳源，但除去），培養(yǎng)基中就有了碳源，但除去成分，卻使培養(yǎng)基中沒(méi)有了氮源，這時(shí)就只能成分，卻使培養(yǎng)基中沒(méi)有了氮源，這時(shí)就只能用于培養(yǎng)固氮微生物了。對(duì)于菌種鑒定，往往用用于培養(yǎng)固氮微生物了。對(duì)于菌種鑒定，往往用的是固體培養(yǎng)基，而表中沒(méi)有凝固劑，需要加入的是固體培養(yǎng)基，而表中沒(méi)有凝固劑，需要加入常見(jiàn)的凝固劑常見(jiàn)的凝固劑瓊脂。瓊脂。