鄰菲羅啉分光光度法測(cè)定鐵一

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1、鄰菲羅啉分光光度法測(cè)定鐵鄰菲羅啉分光光度法測(cè)定鐵 （一）（一）E-mail:ruiting_儀器分析實(shí)驗(yàn)儀器分析實(shí)驗(yàn)紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法 紫外紫外-可見分光光度法是研究物質(zhì)分子在紫外可見分光光度法是研究物質(zhì)分子在紫外-可見光區(qū)分子吸收可見光區(qū)分子吸收光譜的分析方法。光譜的分析方法。入射光入射光I0透射光透射光It0lglgtIATI 吸光度：吸光度：?jiǎn)喂馐贤饪梢姺止夤舛扔?jì)主要部件單光束紫外可見分光光度計(jì)主要部件原理：原理：由光源發(fā)出的連續(xù)光譜，進(jìn)入單色器經(jīng)色散元件分光，由光源發(fā)出的連續(xù)光譜，進(jìn)入單色器經(jīng)色散元件分光，獲得的單色光分別通過參比溶液和樣品溶液，進(jìn)行光強(qiáng)度（吸

2、獲得的單色光分別通過參比溶液和樣品溶液，進(jìn)行光強(qiáng)度（吸收）的測(cè)定。收）的測(cè)定。0.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器顯示顯示（一）、掌握分光光度法測(cè)定鐵的原理及方法（一）、掌握分光光度法測(cè)定鐵的原理及方法（二）、通過測(cè)定鐵的條件試驗(yàn)，掌握分光光度法測(cè)定鐵的條（二）、通過測(cè)定鐵的條件試驗(yàn)，掌握分光光度法測(cè)定鐵的條件及方案的擬定。件及方案的擬定。（三）、掌握分光光度計(jì)的組成部分，操作注意事項(xiàng)和如何使（三）、掌握分光光度計(jì)的組成部分，操作注意事項(xiàng)和如何使用它實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的檢測(cè)。用它實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的檢測(cè)。（四）、掌握（四）、掌握7200型分光光度計(jì)的使用方法。型分光光度計(jì)的使用方法。一、實(shí)驗(yàn)

3、目的一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康腖amber-Beer定律定律 Lambert-Beer定律定律是說明物質(zhì)對(duì)單色光的吸光度（是說明物質(zhì)對(duì)單色光的吸光度（A）與吸）與吸光物質(zhì)的濃度（光物質(zhì)的濃度（c）和）和 液層厚度（液層厚度（l）間的關(guān)系的定律，是光吸）間的關(guān)系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外收的基本定律，是紫外-可見光度法定量的基礎(chǔ)?？梢姽舛确ǘ康幕A(chǔ)。Sample (conc. C)Path length l入射光入射光 I0透射光透射光 It A Ecl濃度濃度（比爾定律）（比爾定律）厚度厚度(朗伯定律）朗伯定律）吸光系數(shù)吸光系數(shù)吸吸光光度度二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 在在pH=29的條件下，的條件下

4、，F(xiàn)e2+與鄰菲羅啉（鄰二氮菲）生成很與鄰菲羅啉（鄰二氮菲）生成很穩(wěn)定的橙紅色的絡(luò)合物，其反應(yīng)如下：穩(wěn)定的橙紅色的絡(luò)合物，其反應(yīng)如下：此絡(luò)合物的此絡(luò)合物的logK穩(wěn)穩(wěn)=21.3，=11000。 顯色反應(yīng)：使得無色物質(zhì)通過反應(yīng)生成有色物質(zhì)，提高顯色反應(yīng)：使得無色物質(zhì)通過反應(yīng)生成有色物質(zhì)，提高測(cè)定靈敏度和選擇性。測(cè)定靈敏度和選擇性。鄰菲羅啉鄰菲羅啉-Fe2+配合物的紫外吸收光譜配合物的紫外吸收光譜510nm青綠色青綠色橙紅色橙紅色4Fe3+2NH2OHHCl4Fe2+N2 +H2O+4H+ +2Cl-在顯色前，首先用在顯色前，首先用鹽酸羥胺鹽酸羥胺把把Fe3+還原為還原為Fe2+： 測(cè)定時(shí)，控制溶

5、液酸度在測(cè)定時(shí)，控制溶液酸度在pH=29較適宜，酸度過高，反較適宜，酸度過高，反應(yīng)速度慢，酸度太低，則應(yīng)速度慢，酸度太低，則Fe2+水解，影響顯色。通常在水解，影響顯色。通常在pH值值5的緩沖液介質(zhì)中測(cè)定。的緩沖液介質(zhì)中測(cè)定。 本試驗(yàn)中用本試驗(yàn)中用HAc-NaAc緩沖溶液緩沖溶液三、儀器和試劑三、儀器和試劑7200型可見分光光度計(jì)、型可見分光光度計(jì)、pHS-3B型酸度計(jì)型酸度計(jì)儀器：儀器：鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（CFe3+=10 g/ml）10%鹽酸羥胺水溶液鹽酸羥胺水溶液0.1鄰菲羅啉水溶液鄰菲羅啉水溶液1mol/L NaAc緩沖溶液緩沖溶液C(HCl)=0.1mol/L溶液溶液 C(NaO

6、H)=0.4mol/L溶液溶液試劑：試劑：四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）條件試驗(yàn)（一）條件試驗(yàn)F 1、測(cè)定波長(zhǎng)選擇、測(cè)定波長(zhǎng)選擇：吸收曲線：吸收曲線(A-l l曲線曲線)的繪制，選擇最大的繪制，選擇最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)；吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)；F 2、反應(yīng)時(shí)間選擇、反應(yīng)時(shí)間選擇：鄰菲羅啉鐵配合物的穩(wěn)定性，繪制：鄰菲羅啉鐵配合物的穩(wěn)定性，繪制A-t曲線；曲線；F 3、顯色劑用量、顯色劑用量：顯色劑濃度的影響，繪制：顯色劑濃度的影響，繪制A-V曲線；曲線；F 4、pH選擇選擇：溶液酸度對(duì)配合物的影響，繪制：溶液酸度對(duì)配合物的影響，繪制A-pH曲線。曲線。 1、吸收曲線的繪制、吸收曲線的繪制試樣配

7、制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%參比溶液參比溶液0.00mL1mL5mL5mL試液試液5.00mL1mL5mL5mL吸收曲線（吸收曲線（A-） 波長(zhǎng)波長(zhǎng)(nm)450460470480490500510吸光度吸光度A波長(zhǎng)波長(zhǎng)(nm)520530540550560570吸光度吸光度A用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL靜置靜置10分鐘，測(cè)試分鐘，測(cè)試 2、鄰菲羅啉配合物的穩(wěn)定性、鄰菲羅啉配合物的穩(wěn)定性試樣配制：與實(shí)驗(yàn)試樣配制：與實(shí)驗(yàn)1一樣，可共用。一樣，可共用。鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸

8、羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%參比溶液參比溶液0.00mL1mL5mL5mL試液試液5.00mL1mL5mL5mL曲線（曲線（A-t）：）：時(shí)間時(shí)間t (min)515306090吸光度吸光度A檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：510nm用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL0 2 4 6 10 15 45 60 3、顯色劑濃度影響、顯色劑濃度影響試樣配制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液CFe3+=10g/mL鹽酸羥胺鹽酸羥胺10%NaAc緩沖液緩沖液1mol/L鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%試液試液10.00mL1mL5mLx mL曲線（曲線（c-A） 鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%

9、0.10mL0.30mL0.50mL1.00mL3.00mL5.00mL10.00mL吸光度吸光度A參比：蒸餾水；檢測(cè)波長(zhǎng)：參比：蒸餾水；檢測(cè)波長(zhǎng)：510nm靜置靜置10分鐘，測(cè)試分鐘，測(cè)試用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL 4、溶液酸度對(duì)配合物的影響、溶液酸度對(duì)配合物的影響試樣配制：試樣配制：鐵標(biāo)液鐵標(biāo)液10g/mL鹽酸羥鹽酸羥胺胺10%pH調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)溶液溶液鄰菲羅啉鄰菲羅啉0.1%pH值值吸光度吸光度110.00mL2mL5mL 0.4mol/LNaOH5mL210.00mL2mL5mL 0.1mol/LHCl5mL310.00mL2mL5mL NaAc緩沖緩沖5mL參比：蒸餾水作參比；檢

10、測(cè)波長(zhǎng)：參比：蒸餾水作參比；檢測(cè)波長(zhǎng)：510nm溶液反應(yīng)溶液反應(yīng)5分鐘后測(cè)量，分鐘后測(cè)量，加樣順序從左到右加樣順序從左到右，看溶液，看溶液pH值對(duì)配值對(duì)配合物穩(wěn)定性和配位反應(yīng)的速度的影響。合物穩(wěn)定性和配位反應(yīng)的速度的影響。用蒸餾水定容至用蒸餾水定容至50mL1、移液管的使用、移液管的使用 常見移液管：標(biāo)有常見移液管：標(biāo)有溫度和容量溫度和容量(注意是注意是否標(biāo)有否標(biāo)有吹吹) 用途：用途：準(zhǔn)確移取一準(zhǔn)確移取一定體積的液體定體積的液體 操作：操作：洗滌洗滌(蒸餾水蒸餾水)、潤(rùn)洗潤(rùn)洗(3次次)、移液、移液、洗滌干凈洗滌干凈注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、整個(gè)操作過程中，保持移液管的垂直；、整個(gè)操作過程中，保持

11、移液管的垂直；2、讀數(shù)、讀數(shù)時(shí)視線與凹液面平齊；時(shí)視線與凹液面平齊；3、每次移液后，錐形瓶壁用蒸餾水沖、每次移液后，錐形瓶壁用蒸餾水沖洗（洗瓶的頭不要碰到瓶壁）洗（洗瓶的頭不要碰到瓶壁）容量瓶的使用容量瓶的使用注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、使用前要檢漏。加水至刻度，、使用前要檢漏。加水至刻度，塞上瓶塞，倒立，檢查是否漏水，塞上瓶塞，倒立，檢查是否漏水，瓶塞旋轉(zhuǎn)瓶塞旋轉(zhuǎn)180，如上操作。，如上操作。2、使用過程中，防止瓶塞被混、使用過程中，防止瓶塞被混淆污染，不能隨意放置桌上。淆污染，不能隨意放置桌上。3、洗滌時(shí)洗至不掛水珠，再用、洗滌時(shí)洗至不掛水珠，再用蒸餾水潤(rùn)洗蒸餾水潤(rùn)洗3次，用鉻酸洗液清次，用鉻

12、酸洗液清洗。洗。4、讀數(shù)時(shí)要用手前、讀數(shù)時(shí)要用手前3指輕輕夾起指輕輕夾起容量瓶，使之自然垂直，再讀數(shù)。容量瓶，使之自然垂直，再讀數(shù)。5、容量瓶不可烘干，防止體積、容量瓶不可烘干，防止體積變化。變化。7200可見分光光度計(jì)可見分光光度計(jì)1、選擇模式：、選擇模式：mode 透光率（透光率（Transmittance ） 吸光度（吸光度（Absorbance ）校正：校正：透光率模式透光率模式全黑比色皿：全黑比色皿：0%空白溶液：空白溶液：100%測(cè)試：測(cè)試：吸光度模式吸光度模式2、波長(zhǎng)選擇、波長(zhǎng)選擇轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)旋鈕轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)旋鈕每次測(cè)量前都要重新校正每次測(cè)量前都要重新校正。測(cè)試從低濃度到高濃度，測(cè)測(cè)試從低濃度到高濃度，測(cè)試前比色皿要用待測(cè)液試前比色皿要用待測(cè)液潤(rùn)洗潤(rùn)洗。選擇模式為透過率選擇模式為透過率再按再按0%模式不變模式不變?cè)侔丛侔?00%選擇模式為吸光度選擇模式為吸光度讀取讀數(shù)讀取讀數(shù)數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理用用excel作圖作圖電子圖表班長(zhǎng)收齊后壓縮電子圖表班長(zhǎng)收齊后壓縮發(fā)送到：發(fā)送到：ruiting_另外，實(shí)驗(yàn)報(bào)告每人一份，將圖表打印出來附在末尾。另外，實(shí)驗(yàn)報(bào)告每人一份，將圖表打印出來附在末尾。