《DNA的粗提取與鑒定》課件(新人教版選修1)【上課材料】

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1、1公開(kāi)課2公開(kāi)課3公開(kāi)課當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol2 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最的溶解度最大，濃度為大，濃度為 0 014 mol14 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最低。利用這一的溶解度最低。利用這一原理，可以使原理，可以使DNADNA在鹽溶液中在鹽溶液中溶解或析出溶解或析出如何通過(guò)控制如何通過(guò)控制NaClNaCl溶液的濃度使溶液的濃度使DNADNA在在鹽溶液中溶解或析出？鹽溶液中溶解或析出？4公開(kāi)課5公開(kāi)課6公開(kāi)課7公開(kāi)課3 3、合適的材料：、合適的材料：原因：一是雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水漲破。8

2、公開(kāi)課9公開(kāi)課2 2、植物細(xì)胞、植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先植物細(xì)胞需要先用一定的用一定的洗滌劑和洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜食鹽溶解細(xì)胞膜 實(shí) 例：提 取 洋 蔥實(shí) 例：提 取 洋 蔥DNADNA時(shí)，在切碎的洋時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過(guò)濾的攪拌和研磨，過(guò)濾后收集研磨液后收集研磨液10公開(kāi)課討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？具體做法：具體做法：10mL雞血雞血20mL蒸餾水蒸餾水同同方向攪拌方向攪拌3層尼龍布過(guò)濾層尼龍布過(guò)濾濾液濾液11公開(kāi)課為 什 么 反 復(fù)為 什

3、 么 反 復(fù)地 溶 解 與 析地 溶 解 與 析出出DNADNA，能夠，能夠去除雜質(zhì)去除雜質(zhì)方案一方案一、在濾液中加入、在濾液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液濃度溶液濃度為為2mol/L2mol/L，過(guò)濾除去，過(guò)濾除去不溶的雜質(zhì)不溶的雜質(zhì)，再加入，再加入蒸餾蒸餾水水，調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)NaClNaCl溶液濃度為溶液濃度為0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，過(guò)濾除去，過(guò)濾除去溶液中的雜質(zhì)溶液中的雜質(zhì)，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。12公開(kāi)課方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，

4、反應(yīng)10101515分鐘。分鐘。方案三、將濾液放在方案三、將濾液放在606075750 0C C的恒溫水浴箱中保溫的恒溫水浴箱中保溫10101515分鐘。分鐘。為了純化提取的為了純化提取的DNADNA需要將濾液作進(jìn)一步處理需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？哪些細(xì)胞成分？13公開(kāi)課具體做法具體做法:方案一：方案一：30mL濾液濾液35gNaCl同方向攪拌同方向攪拌，DNA溶解溶解加入加入蒸餾水蒸餾水DNA析出析出過(guò)濾得到過(guò)過(guò)濾得到過(guò)濾物濾物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解液溶解液方案二：方案二：

5、30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置靜置1015分鐘分鐘DNA濾液濾液方案三：方案三：30mL濾液濾液6075處理處理過(guò)濾獲得過(guò)濾獲得DNA濾液濾液14公開(kāi)課15公開(kāi)課在沸水中加熱的目的：加快顏色反應(yīng)的速率在沸水中加熱的目的：加快顏色反應(yīng)的速率沸水加熱：說(shuō)明沸水加熱：說(shuō)明DNA對(duì)高溫具有較強(qiáng)的耐受性對(duì)高溫具有較強(qiáng)的耐受性16公開(kāi)課1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入血液中需要加入3g檸檬酸鈉檸檬酸鈉，防止，防止血液凝固。血液凝固。2、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不和，否則容易

6、產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免以免加劇加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分分子不能形成絮狀沉淀。子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)，否則會(huì)影響鑒定的效果。影響鑒定的效果。17公開(kāi)課18公開(kāi)課制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液加加檸檬酸鈉檸檬酸鈉，靜置或離心，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放破碎細(xì)胞，釋放DNA 加加蒸餾水蒸餾水，同一方向同一方向攪拌攪拌過(guò)濾過(guò)濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNA加入加入NaCl至至2m

7、ol/L，同一方向同一方向緩慢攪拌緩慢攪拌DNA析出析出加加蒸餾水蒸餾水至至0.14mol/L，過(guò)濾過(guò)濾，在溶解到，在溶解到2mol/L 溶液中溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。DNA初步純化初步純化與等體積與等體積95冷卻酒精冷卻酒精混合，析出混合，析出白色白色 絲狀物絲狀物除去核蛋白、除去核蛋白、RNA、多糖等。、多糖等。DNA鑒定鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色19公開(kāi)課2.實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和0.14 molL對(duì)對(duì)DNA有何影響有何影響?1.在在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯的粗提取實(shí)驗(yàn)

8、過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出20公開(kāi)課3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)會(huì)染成會(huì)染成()()A.A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍(lán)色藍(lán)色4.提取雞血中的提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液時(shí)，為什么要除去血液中的上清液中的上清液?答：答：DNA的提取，關(guān)鍵是對(duì)雜質(zhì)的去除，由于的提取，關(guān)鍵是對(duì)雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以，所以要除去上清液要除去上清液(含有蛋白質(zhì)含有蛋白質(zhì))。答：答：D21公開(kāi)課